手機(jī)掃碼訪問本站
微信咨詢
脂肪酶，全稱為三酰基甘油水解酶，它能夠在脂-水界面上催化酯鍵水解，可以催化三酰甘油酯及其它一些水不溶性酯類的水解、醇解、酯化、轉(zhuǎn)酯化及酯類的逆向合成反應(yīng)。脂肪酶廣泛存在動植物和微生物中，由于微生物種類多、分布廣、適應(yīng)性強(qiáng)、進(jìn)化快，在微生物中的脂肪酶往往具有比動植物來源的脂肪酶具有更廣的作用溫度、pH和底物特異性等優(yōu)勢。微生物是工業(yè)用脂肪酶的主要來源。
脂肪酶在工業(yè)生產(chǎn)中被廣泛應(yīng)用。如在食品工業(yè)中脂肪酶被用于肉類脫脂、面粉改良、油脂改性、奶酪加工、釀酒和醬料加工。在飼料工業(yè)中，脂肪酶與其他碳水化合物降解酶復(fù)配成復(fù)合酶作為飼料添加劑，可以有效提高飼料利用率。脂肪酶還被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥和精細(xì)化工工業(yè)中的手性化合物的生物拆分。在造紙工業(yè)中，脂肪酶可以實現(xiàn)木漿中松脂的酶法去除。在生物柴油工業(yè)中，脂肪酶可以用于催化油脂與斷鏈醇的酯交換反應(yīng)，用于酶法合成生物柴油。在洗滌工業(yè)、皮革加工和紡織工業(yè)中脂肪酶也被大量應(yīng)用。
將油體蛋白、蛋白連接肽與脂肪酶依次連接構(gòu)成重組脂肪酶，然后將重組脂肪酶轉(zhuǎn)化水稻，獲得含有重組脂肪酶基因的水稻種子，將所述的水稻種子脫殼勻漿，再在勻漿液中加入油脂，收集油層，獲得脂肪酶提取液。
一種采用固定化馬抗體提取純化脂肪酶的方法，包括步驟：
S1：將產(chǎn)脂肪酶的假單胞菌ATCC 21808的單一菌落置于裝有25mL搖瓶培養(yǎng)液的250mL搖瓶中，在28℃、200rpm條件下培養(yǎng)20h，然后按10％的接種量轉(zhuǎn)入發(fā)酵培養(yǎng)液中，在28℃、200rpm條件下培養(yǎng)68h，得到發(fā)酵液；其中，每升搖瓶培養(yǎng)液中包括：酵母提取物5g、蛋白胨5g、植物油10g，余量為水；pH值為7.0；每升發(fā)酵培養(yǎng)液中包括：酵母提取物10g、蛋白胨5g、NaCl 0.5g、植物油10g，余量為水；pH值為7.0；
S2：將發(fā)酵液離心，收集上清液，得到脂肪酶粗酶液；其中，離心是采用高速冷凍離心機(jī)，在4℃、10800g條件下離心15min；
S3：將脂肪酶粗酶液上固定化馬抗體柱，上柱期間，檢測流出液的脂肪酶活性，直到有脂肪酶活性流出，停止上液；之后用pH值為7.2的0.1M的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀緩沖液洗柱，再采用pH值為3的0.1M磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液洗脫，收集洗脫液，得到純化后的脂肪酶；并且待酶流出后，立即用pH值為8的1M的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀緩沖液洗柱至中性，也用該溶液調(diào)洗脫液至pH值至7；其中，固定化馬抗體柱的制備方法包括步驟：選4匹蒙古馬(重量和對應(yīng)的年齡分別為：重量為240公斤且年齡為3歲、重量為290公斤且年齡為5歲、重量為320公斤且年齡為7歲、重量為360公斤且年齡為10歲)，每兩周免疫一次，共進(jìn)行12周的免疫，每次2mL，劑量分別為15mg脂肪酶加等量的弗氏完全佐劑，多點皮下免疫，ELISA檢測抗體滴度大于1：10000后收集抗血清；將抗血清離心除去細(xì)胞成分和其他沉淀物，收集上清液后采用proteinA或proteinG親和層析柱純化出多克隆抗體；將多克隆抗體與活化的Sepharose2B連接，得到固定化馬抗體柱；
S4：在純化后的脂肪酶中加入聚乙二醇，使脂肪酶沉淀；之后離心，收集沉淀；將沉淀透析后凍干干燥，得到脂肪酶，酶活經(jīng)測定達(dá)15-25萬單位/克；其中，離心是在4℃、000g條件下離心8min。
[1] [中國發(fā)明,中國發(fā)明授權(quán)] CN201611001296.4 一種脂肪酶提取方法
[2] [中國發(fā)明] CN201910183987.8 采用固定化馬抗體提取純化脂肪酶的方法