9004-06-2 / 彈性蛋白酶的提取方法

彈性蛋白酶，廣泛存在于哺乳動物胰臟，彈性蛋白酶的水解機制，是首先使彈性蛋白質的結構變疏松并溶解，對甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)殘基有很高的水解，將已溶解的彈性蛋白質降解成可溶的多肽及氨基酸。

用途

胰彈性酶原合成于胰臟的腺泡組織，經胰蛋白酶或腸激酶激活后才成為活性酶。人胰每克含0.3-6.2單位彈性酶，牛、豬胰彈性酶含量大約高5倍。

彈性蛋白酶經濟價值極高，在醫藥方面主要作為治療藥物:

(I)治療高血脂癥:(2)防治動脈粥樣硬化:(3)抑制脂肪肝發展:(4)治療慢性氣管炎及其它結締組織纖維增生性疾病:(5)外用于消除皮膚焦痂、碎肩，用于燒傷患者的治療以及皮膚潰瘍、口腔潰瘍等癥。

提取方法

藥用的彈性蛋白酶主要從豬胰臟中提取，目前，我們通過檢索發現彈性蛋白酶的提取分離技術多采用離子交換樹脂從胰臟提取液分離精制而得，如南昌市浩然生物醫藥有限公司公開了《從豬胰臟中提取純化彈性蛋白酶》專利(申請號:200810107092.8)，常州千紅生化制藥有限公司純化彈性蛋白酶的方法(申請號:200710020819.4)專利，均采用樹脂進行純化，樹脂的價格昂貴，使大規模工業化生產成本高。

而本發明是靈活運用胰酶水解、丙酮沉淀、磷酸緩沖液鹽溶、硫酸銨鹽析等現代蛋白純化技術，使用磷酸鹽、丙酮、硫酸銨等價格便宜的輔料，制備彈性蛋白酶，不僅在一定程度上降低了成本，且產品的收率也能達到15萬單位/kg胰臟。

發明內容

本發明的目的是從合格的動物胰臟中提取彈性蛋白酶。

本發明的技術方案是:將合格的動物胰臟經過絞碎后，靈活運用胰酶水解、丙酮沉淀、磷酸緩沖液提純及硫酸銨鹽析結晶等現代蛋白純化技術，制備彈性蛋白酶的方法。本發明操作簡單、成本低，非常適合于規?；笊a。包括如下步驟:

(I)水解:將新鮮或冷凍豬胰臟絞碎置于容器中，加入2?5倍量(TC以下的丙酮，在O°C左右攪拌脫水0.5?1.5小時，離心得沉淀物，加入0.5?1.5倍量的水及0.01?0.02倍量胰酶攪拌溶解，用6%?10 %氫氧化鈉溶液調至pH值至6.0?9.0，于15°C?25°C保溫攪拌I?3小時，再加入娃藻土充分攪拌，過濾。

(2)沉淀:收集濾液與1.5?3倍量丙酮攪勻，靜置10?14小時，虹吸棄去上層丙酮清液，用1.5?2倍量丙酮分3?4次洗滌沉淀物，過濾甩干，干燥，即得彈性蛋白酶粗品。

(3)提純:將粗品與45?60倍量磷酸緩沖液攪拌0.5?1.5小時，于15°C?25°C靜置15?25小時，按照溶液的體積加入其量約3%?7%的硅藻土拌勻，過濾;往濾液中加入硫酸錢，至硫酸錢濃度達35%?45%。過濾，得鹽析物;將鹽析物再按Ig: 8?1ml的比例溶于碳酸緩沖液，然后在攪拌下逐滴加入飽和硫酸銨溶液，直至微渾，O °C?8 °C下靜置48?72小時，慢慢形成針狀結晶，過濾。

(4)干燥:濾取晶體并用水沖洗3?5次，冷凍干燥，即可得彈性蛋白酶。