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L-亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽是合成烏苯美司的起始原料。烏苯美司是氨基肽酶 N( CD13) 和亮氨酸氨基 肽酶的抑制劑，可通過(guò)增強(qiáng)宿主免疫功能、抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡等發(fā)揮抗腫瘤作用。通過(guò)采用全合成方法制備烏苯美司，L-亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽是合成烏苯美司的起始原料，其光學(xué)純度將直接影響烏苯美司的光學(xué)純度。
因此必須對(duì)其對(duì)映異構(gòu)體的含量進(jìn)行控制，從而控制烏苯美司的光學(xué)純度，確保產(chǎn)品質(zhì)量。由于 L-亮氨酸叔酯鹽酸鹽結(jié)構(gòu)中只有一個(gè)發(fā)色團(tuán)羰基，使用常規(guī)的紫外檢測(cè)器難以檢測(cè)。通過(guò)參考相關(guān)文獻(xiàn)，采用 Nα-( 2，4-二硝基-5-氟苯基) -L-丙氨酰胺( Marfey 試劑) 作為柱前衍生試劑，建立柱前衍生化-高效液相色譜法( HPLC) 測(cè)定 L-亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽的對(duì)映異構(gòu)體的方法，能快速、簡(jiǎn)便、有效地對(duì)異構(gòu)體雜質(zhì)進(jìn)行分析檢測(cè)。
L-亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽是合成烏苯美司的起始原料。其應(yīng)用舉例如下：合成烏苯美司，以(2S，3R)-3-氨基-2-羥基-4-苯基丁酸為原料，與二碳酸二叔丁酯反應(yīng)，且二碳酸二叔丁酯采用分批逐次的加入方式，制備獲得中間體I，中間體I與L-亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽反應(yīng)制備獲得中間體II，其中L-亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽作為優(yōu)選，有利于提高中間體II的收率和純度，中間體II在酸堿體系下分別脫去保護(hù)基團(tuán)叔丁氧羰酰基和叔丁酯，此操作只需通過(guò)酸堿體系調(diào)節(jié)酸堿值就能有效將保護(hù)基團(tuán)高效脫去，提高烏苯美司成品的收率和純度。所述工藝路線如下：
(1)制備中間體I(2S，3R)-叔丁氧羰基-3-氨基-2-羥基-4-苯基丁酸
將原料(2S，3R)-3-氨基-2-羥基-4-苯基丁酸用水溶解，加入10％ 兩相溶劑，且用堿水調(diào)PH至大于8，分批逐次加入二碳酸二叔丁酯，且溶液PH維持在大于8，加入乙酸乙酯，調(diào)PH至1—3，萃取分層 收集有機(jī)相，干燥，濃縮結(jié)晶，即得；為了提高中間體I的收率純度，在中間體I的制備過(guò)程中，經(jīng)多次反復(fù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，原料(2S，3R)-3-氨基-2-羥基-4-苯基丁酸經(jīng)水溶解、加入10％兩相溶劑，堿水調(diào)節(jié)PH處理步驟后，加入二碳酸二叔丁酯，其中二碳酸二叔丁酯的加入方式直接影響中間體I的收率，如果采用直接投入二碳酸二叔丁酯與原料(2S，3R)-3-氨基-2-羥基-4- 苯基丁酸反應(yīng)，收率較低，當(dāng)采用分批逐次加入二碳酸二叔丁酯時(shí)，中間體I的反應(yīng)收率顯著增加。
在中間體I的制備過(guò)程中，制備工藝所采用的兩相溶劑為丙酮、甲醇、四氫呋喃中的任意一種；所采用的堿水調(diào)PH，堿水為碳酸鈉水溶液、氫氧化鈉水溶液、三乙胺中的任意一種。中間體I的整個(gè)制備反應(yīng)過(guò)程均在室溫下進(jìn)行，收率為92％。
(2)制備中間體IIN-[(2S，3R)-3-叔丁氧羰基氨基-2-羥基-4- 苯基丁酰基]-L-亮氨酸叔丁酯
將中間體I及L-亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽加入四氫呋喃中，冰浴下攪拌后依次加入1-羥基苯并三唑，三乙胺，二環(huán)己基碳二亞胺，攪拌過(guò)夜，濾除析出的二環(huán)己基脲，濾液減壓濃縮，用乙酸乙酯溶解后， 依次用稀酸、飽和食鹽水洗滌后，用無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮，石油醚打漿，抽濾即得。
本實(shí)驗(yàn)中操作步驟中石油醚打漿是指采用石油醚精制的實(shí)驗(yàn)過(guò)程，具體是指在濃縮操作后，加入有機(jī)溶劑石油醚，升溫將固體溶解，攪拌，使溶液在冰水浴中降溫，有固體析出時(shí)，抽濾即得。中間體I制備中間體II的過(guò)程中，為了提高中間體II的收率和純度，原料優(yōu)選L-亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽與中間體I反應(yīng)。步驟(2)中中間體I制備中間體II的過(guò)程中所采用的L-亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽的制備步驟為：
在1000ml三口瓶中加入100gL-亮氨酸，280ml醋酸叔丁酯，114g 高氯酸，在10℃左右攪拌反應(yīng)36小時(shí)，然后加入280ml水，緩慢加入固體碳酸氫鈉中和體系，有大量氣泡產(chǎn)生；然后調(diào)節(jié)PH至7左右，過(guò)濾分層，水相用100ml醋酸叔丁酯萃取一次，合并有機(jī)相，加入 100ml飽和碳酸氫鈉水溶液攪拌10分鐘，分層后有機(jī)相依次用100ml 飽和碳酸氫鈉水溶液、100ml飽和食鹽水沖洗，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥；在55℃下減壓濃縮，加入200ml石油醚，冰浴下緩慢滴加乙酸乙酯/氯化氫調(diào)PH至5，攪拌30分鐘后過(guò)濾，濾餅用50ml石油醚沖洗后烘干，即得產(chǎn)品，產(chǎn)品外觀為白色結(jié)晶，收率為29.4％。
(3)由中間體II制備烏苯美司
將所述步驟(2)制備的中間體II用乙醇溶解后，用鹽酸調(diào)節(jié) PH至1—2，40℃-50℃下攪拌反應(yīng)4—5小時(shí)，體系降至10℃以下，緩慢滴加氫氧化鈉溶液，調(diào)PH至8以上，過(guò)夜，調(diào)PH至6—7，減壓濃縮，殘?jiān)屑尤胨?℃—6℃下攪拌結(jié)晶，過(guò)濾，用1mol/L鹽酸溶解，加入少量活性炭，濾除不溶物，用稀氨水調(diào)PH5—6，過(guò)濾，濾餅用丙酮洗滌，干燥即得。
在本實(shí)驗(yàn)步驟中，主要采用脫保護(hù)劑將叔丁氧羰酰基、叔丁酯脫去，反應(yīng)過(guò)程很難控制，脫保護(hù)劑有多種，優(yōu)選酸堿脫去，酸堿分別 為稀鹽酸、氫氧化堿，在本實(shí)驗(yàn)中，中間體II用乙醇溶解后，用鹽酸調(diào)節(jié)PH至1—2，反應(yīng)后，待溫度降低至10℃以下后，采用氫氧化鈉溶液調(diào)PH至8以上，且采用緩慢滴加氫氧化鈉的方式，與其他脫保護(hù)劑相比，該酸堿脫保護(hù)劑制備獲得的烏苯美司成品的收率和純度最佳。
[1] 柱前衍生化法測(cè)定 L-亮氨酸叔丁酯鹽酸鹽的對(duì)映異構(gòu)體
[2] CN201410784653.3一種烏苯美司的新型合成工藝