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吖啶橙又名3，6-雙(二甲胺基)吖啶鹽酸鹽。橙色粉末，其水溶液和醇溶液均為橙黃帶綠色熒光。吖啶橙(AO)是一種常用的三環芳香類陽離子型的堿性熒光染料。常用于細胞內DNA與RNA的定量測定及活細胞的染色及其它熒光分析。AO的吸收、熒光光譜及強度會受其結構和環境因素(待測物、溶劑、酸堿性、濃度和溫度)的影響而發生變化。例如，AO與DNA作用時，激發最大波長502nm，發射最大525nm(綠光)。與RNA作用時，激發最大波長移動到460nm(藍光)，發射最大移動到650nm(紅光)。當溶液的性質發生變化，AO的吸收與熒光光譜就會發生變化。溶劑效應的研究與分析有利于理解環境效應和溶液中激發態分子的去激發作用和馳豫現象及發光機理。
AO分子含有給電子基團二甲胺基，而且環上的氮原子并未參與成鍵，仍以sp2雜化，與苯環形成n-π共軛，因此，吖啶環上N原子易發生季銨堿反應。AO與H+或OH-相互作用，于是，AO可以看作為具有共軛酸堿型的熒光染料，酸性基團的離解作用或堿性基團的質子化作用，可能改變與發光過程相競爭的非輻射躍遷過程的性質和速率，也會改變AO在水溶液中氫鍵的形成能力，從而影響化合物的熒光光譜和強度。
1）賦存狀態
為了進一步探討AO在溶液中的聚集狀熒光強度值變化曲線，檢測了不同濃度的AO的熒光光譜，考察熒光λmax的變化。在稀AO溶液中，熒光強度最大。隨AO濃度增大，熒光強度越弱。相對稀溶液AO的熒光光譜，濃度大的AO熒光λmax紅移。這可解釋吖啶橙在稀溶液中呈綠色；在濃溶液中，呈現橙紅色，是因在濃溶液中出現二聚體和多聚體。這說明在稀溶液中只有AO單體，在較高濃度的溶液中，AO單體與AOAO二聚體形式共存，在高濃度溶液中，AO單體很少，主要以AOAO二聚體或(AO)n多聚體形式存在。AO在低濃度水溶液中比在高濃度易形成氫鍵，其熒光光譜向短波方向移動。
2）發光機理
AO分子存在給電子取代基[─N(CH3)2]上的非鍵孤對電子，在AO分子中存在n-π＊躍遷和分子內電荷轉移躍遷，與雜氮芳環之間存在著激發態電荷轉移作用而擴大了共軛體系，導致熒光光譜在水溶液中向長波方向移動。溶液pH的變化，對AO上的非鍵孤對電子有影響。AO質子化作用使得共軛體系范圍減小，導致熒光光譜在水溶液中向短波方向移動，AO離解作用又使得激發態內電荷發生轉移而擴大了共軛體系，導致AO在堿性條件下熒光光譜向長波方向移動，熒光強度降低。溶液氫鍵的形成能力的光譜位置有較大影響，隨著氫鍵的形成能力增大，最低激發態單重態與基態之間的能量間隙增大，熒光光譜向短波方向移動。
在分析化學中用作熒光指示劑，也用于腫瘤細胞及細菌等染色。市售品也有為硫酸鹽者。其應用舉例如下：
1）吖啶橙共振光散射法測定脫氧核糖核酸。有實驗研究了吖啶橙與DNA作用的共振散射光譜，發現在pH11的堿性溶液中痕量核酸對吖啶橙的共振散射光產生增強作用，且增強程度與核酸濃度之間有良好的線性關系。據此建立了測定核酸的高靈敏共振光增強分析方法。其最大散射波長均位于324nm處，測定魚精DNA(fsDNA)的線性范圍是3.1×10-8～7.3×10-6g·mL-1，檢測限20.5ng·mL-1，測定小牛胸腺DNA(ctDNA)的線性范圍是7.5×10-8～9.8×10-6g·mL-1，檢測限20.8ng·mL-1。該方法簡單，操作方便，選擇性好，靈敏度高，用于合成樣品的測定結果滿意。
2）吖啶橙分光光度法測定雙酚A。在酸性介質中，雙酚A對羥基自由基氧化吖啶橙的反應具有抑制作用，據此建立了測定雙酚A含量的分光光度分析方法。確定了最佳實驗條件，在此條件下得到吖啶橙溶液吸光度的變化值與雙酚A濃度的線性關系，其線性范圍為10~200ng/mL，工作曲線為ΔA=0.643logρ-0.544，線性相關系數為0.9991，檢出限為1.05ng/mL。應用本法測定4種塑料制品中雙酚A的含量，回收率在95.0%~104.3%之間，RSD在1.7%~3.1%之間。
3）吖啶橙-氧化石墨烯熒光猝滅法測定多巴胺。在酸性介質中氧化石墨烯對吖啶橙的熒光發生猝滅作用，此時加入適量多巴胺，則導致體系的熒光強度增強，且增強程度與多巴胺的加入量成正比。據此建立了吖啶橙-氧化石墨烯熒光光度法測定多巴胺的方法。多巴胺的質量濃度在0.05~12.0μmol/L范圍內呈線性，線性方程為ΔIF=3.9+57.8c(μmol/L)，相關系數r=0.9933；檢出限為2.9nmol/L。該方法具有良好的選擇性，應用于實際樣品的測定，結果滿意。
[1] 化學物質辭典
[2] 吖啶橙受溶液pH和濃度變化的光譜研究
[3] 吖啶橙共振光散射法測定脫氧核糖核酸
[4] 吖啶橙分光光度法測定雙酚A
[5] 吖啶橙-氧化石墨烯熒光猝滅法測定多巴胺