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117-39-5 / 槲皮素的幾種制備方法報道

背景及概述[1-2]

槲皮素化學名稱為3,3',4',5,7-五羥基黃酮,是植物界分布最廣泛的黃酮類化合物,大約68%的植物中都含有槲皮素,多種食物均含此成分。依據飲食習慣的不同,人體平均每天攝入10~100mg槲皮素。槲皮素具有廣泛的生物學作用,如抗腫瘤、抗炎、抗氧化、降壓、抗菌、抗病毒、抗過敏、抗血小板聚集和清除自由基等。

槲皮素的生理活性遠高于蘆丁,具有抗氧化、抗病毒,以及增強雌性激素的分泌等性質,因此在藥物制劑中,常被用作食品添加劑或輔助藥物給藥。在自然界植物中的分布也很廣泛,但是含量卻很低。槲皮素在植物中的含量也只有千分之幾到萬分之幾,很難提取。

槲皮素的幾種制備方法報道

制備[1-3]

報道一、

a.以黑曲霉菌(Aspergillusniger)在含4%麥芽浸出物和0.5%人參浸出物的培養基中,30℃溫度下通風培養30-40小時,培養后除菌,培養液用80%飽和硫酸銨沉淀酶蛋白,收集沉淀,用pH5.8的0.02M醋酸鈉緩沖液溶解,透析除去硫酸銨,離心除渣,凍干,即得酶。

b.取7克上述酶溶于200毫升pH5.8的0.02M醋酸鈉緩沖液中;取12克市售的商品蘆丁單體與115毫升pH5.8的0.02M醋酸鈉緩沖液和85毫升95%乙醇混合均勻,使反應物蘆丁的濃度為0.01-10%,乙醇濃度為0-35%,在溫度15℃溫度下攪拌反應24小時。

c.溶液中加入36克NaOH,過濾除去蛋白沉淀,濾液中加入400ml2.5NHCl,室溫靜置30分鐘,過濾收集沉淀,沉淀物用蒸餾水充分洗至中性,減壓干燥沉淀,得到6克產物(經高效液相色譜法測定槲皮素含量在90%以上)。

上述酶經DEAE-Cellulose離子交換樹脂柱方法和BioRed蛋白制備色譜儀(文獻3)分離提純得到兩種甙酶蛋白,用SDS電泳方法測定分子量,其酶蛋白分子量分別為58000和68000。分子量為58000的酶蛋白,水解蘆丁的鼠李糖基,變成異槲皮素;分子量為68000的酶蛋白,水解異槲皮素的葡萄糖基,變成槲皮素。

報道二、

將20L水加熱至沸騰后加入蘆丁100g,并保持攪拌狀態以溶解蘆丁,待蘆丁溶解完全后,趁熱抽濾,室溫放置過夜析晶,過濾,干燥,得到精制后的蘆丁;將1%體積百分含量的硫酸水溶液加熱至沸騰后加入精制后的蘆丁,精制后的蘆丁與硫酸水溶液的料液比為1kg:25L,水解完全后,過濾,收集濾餅,蒸餾水洗至中性,以pH試紙檢測,達標后將樣品置于烘箱中干燥,得到槲皮素粗品;往槲皮素粗品中按照1kg:15L的液料比加入乙醇,攪拌均勻,靜置,過濾,干燥,得槲皮素成品,槲皮素成品的純度為99.52%,山奈酚的含量為0.20%,異鼠李素的含量為0.13%,其中純度以峰面積歸一法進行計算。

報道三、

1、蘆丁的提取

取200g生藥蘆丁置于容器中,用清水漂洗干凈,撈取上浮的花蕾并棄去下沉的雜質,將洗凈的花蕾置于容器中加1000ml蒸餾水加熱,超聲30KHz~50KHz提取45min,不斷補充蒸發掉的水分,趁熱過濾,收集濾液,濾渣再加400ml蒸餾水用上述同樣的方法提取一次,合并兩次濾液,濃縮至600ml,放置24h后,析出蘆丁,抽濾,沉淀用少量冷水(0~8℃)洗滌三遍,抽干,60℃以下干燥,稱重得粗提蘆丁19.3g,即可計算粗提蘆丁的收率為9.65%。

2、蘆丁精制

將粗制的蘆丁研細,加95%乙醇回流溶解(每2g蘆丁需要添加70毫升乙醇),趁熱過濾,收取一半的濾液濃縮至原體積的30%~40%(另外一半濾液用于下一步制備槲皮素使用),放置,析出結晶,抽濾,干燥,得精制蘆丁,稱重9.16g,即可計算精制蘆丁的收率9.16%。

3、由所得蘆丁制備槲皮素

取上述步驟中保留的一半蘆丁濾液,加入1mol/L的硫酸,水浴回流1~1.5h,待全部水解后,蒸去乙醇,冷卻、析出槲皮素,抽濾。沉淀槲皮素經過水洗、抽干后,干燥稱重,得槲皮素6.788g,可計算得率為6.788%,再用乙醇重結晶,可得黃色針狀結晶,為槲皮素精品。

參考文獻

[1][中國發明,中國發明授權]CN03133636.1酶法水解蘆丁制備異槲皮素和槲皮素的方法

[2][中國發明,中國發明授權]CN201310608063.0一種高純度槲皮素的制備方法

[3][中國發明]CN201610130091.X一種從槐花米中提取蘆丁并制備槲皮素的方法

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