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膦酰二肽鈉是1972年首先由日本科學家Umezawa等從鏈霉菌的培養液中分離得到的一種含磷的天然糖肽類化合物。目前，膦酰二肽鈉（膦酰二肽鈉）作為常規的生物試劑，每年有大量的市場需求。但是該化合物依賴生物提取，需要大量從美國和日本進口，價格相當昂貴。由此可見，利用化學方法大量、高效的合成高純度的該天然產物在實際應用方面都有著重要的意義。從膦酰二肽鈉（膦酰二肽鈉）發現至今的近三十年時間里，有關該化合物化學合成方法的報道非常有限，而且產率非常低。
膦酰二肽鈉（膦酰二肽鈉）能夠在嗜熱菌蛋白酶（Thermolysin）的活性位點形成非常強的鍵合，對嗜熱菌蛋白酶有非常強的抑制作用。嗜熱菌蛋白酶及其家族金屬蛋白酶（Thermolysin-likeproteinases，TLPs）具有良好的熱穩定性和蛋白質切割活性，廣泛的應用于生物化學、分子生物學、遺傳學、免疫學、腫瘤學、細胞工程等眾多生物和醫學前沿領域。膦酰二肽鈉（膦酰二肽鈉）是從鏈霉素培養液中分離得到的一種含磷的天然糖肽類化合物。該化合物作為嗜熱菌蛋白酶與內皮素轉化酶等金屬蛋白酶的抑制劑在生物醫學前沿領域里有著廣泛應用，是一種重要的生化試劑。例如，嗜熱菌蛋白酶被用來進行蛋白質序列分析、蛋白質純化、細胞外組織解離、肽鍵逆向合成、生物催化轉化等等。因此，作為與嗜熱菌蛋白酶配合使用的強力抑制劑，膦酰二肽鈉（膦酰二肽鈉）在這些領域亦有著廣泛的應用。
一種通過氫亞磷酸二酯中間體合成膦酰二肽鈉（膦酰二肽鈉）的方法，包括以下步驟：
步驟1：O-芐基-O-(α-L-2，3，4-三乙酰基)-L-鼠李糖-1-亞磷酰二異丙胺4的合成：將580mg（2.0mmol，1.0當量）2，3，4-三乙酰-α-L-鼠李糖2和0.51ml（3.4mmol，1.7當量）干燥DBU溶于10ml干燥的乙醚中，在冰浴條件下逐滴加入溶有820mg（3.0mmol，1.5當量）芐氧基二異丙基氨基亞磷酰氯3的乙醚溶液5ml。體系逐漸有白色沉淀析出，滴加完畢后繼續反應30分鐘。減壓濃縮反應液，殘余物用乙腈（5ml）減壓共沸兩次。殘余物溶于乙酸乙酯（5ml），濾除不溶物。濾液濃縮得淡黃色油狀亞磷酰胺中間體4粗品，不需進一步純化，直接用于下一步反應。
步驟2：O-芐基-O-(α-2，3，4-三乙酰基)-L-鼠李糖-1-氫亞磷酸二酯5的合成：向亞磷酰胺中間體4粗品的乙腈溶液（10ml）中加入1H-四氮唑280mg（4.0mmol，2.0當量）和水72μL（4mmol，2.0當量）。室溫攪拌30分鐘后，減壓濃縮反應液。殘余物溶于50ml二氯甲烷，依次用2%的稀鹽酸和水各30ml洗滌。有機相經無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮至干得到淡黃色油狀氫亞磷酸二酯中間體5粗品625mg，不需進一步純化，直接用于下一步反應。
步驟3：N-(O-芐基-O-(α-2，3，4-三乙酰基-L-鼠李糖-1-)磷酰)-L-亮-L-色二肽芐酯7的合成：向溶有326mg（0.8mmol，0.8當量）L-亮-L-色二肽芐酯6的5ml乙腈溶液中加入0.21ml（158mg，1.5mmol，1.5當量）三乙胺，0.48ml（769mg，5.0mmol，5.0當量）四氯化碳。將444mg（1.0mmol，1.0當量）的氫亞磷酸二酯中間體5粗品溶于5ml的乙腈中，在冰浴的條件下，逐滴加入反應瓶中。滴加完畢，繼續反應30分鐘。減壓濃縮反應液。殘余物溶于乙酸乙酯（5ml），濾除不溶物。濾液濃縮得淡黃色油狀膦酰二肽鈉（膦酰二肽鈉）前體7粗品。硅膠柱層析分離（石油醚：乙酸乙酯：2：1至1：1），得無色油狀的膦酰二肽鈉（膦酰二肽鈉）前體7純品517mg，產率：76%。
步驟4：N-(O-α-L-鼠李糖-1-)磷酰)-L-亮-L-色二肽二鈉鹽（膦酰二肽鈉（膦酰二肽鈉））1的合成：向溶有85mg（0.1mmol，1當量）前體7的20ml無水甲醇中加入（10%底物質量）9mg5%鈀碳后，向體系通入氫氣在常壓下進行氫化。室溫攪拌1小時后，向反應中逐滴加入（2.0當量，0.1M）的甲醇鈉甲醇溶液，中和至pH=7。中和完畢后，再緩慢逐滴加入（3.0當量，0.1M）甲醇鈉甲醇溶液。室溫攪拌2小時后，用（3.0當量，0.1M）的鹽酸甲醇溶液中和至pH=7。過濾除去鈀碳，減壓濃縮反應液，殘留物真空干燥，得到58mg白色粉末狀粗品。經葡聚糖凝膠LH-20層析純化（洗脫劑：甲醇），得55mg的白色粉末狀膦酰二肽鈉（膦酰二肽鈉）1純品，產率：94%，熔點：176-179℃。
[1] CN201310204733.2通過氫亞磷酸二酯中間體合成膦酰二肽鈉（膦酰二肽鈉）的方法
[2] 一種通過氫亞磷酸單酯中間體合成膦酰二肽鈉（膦酰二肽鈉）的新方法