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1405-41-0 / 硫酸慶大霉素的制備

背景及概述[1]

硫酸慶大霉素為氨基糖苷類抗生素,對各種革蘭陰性細菌及革蘭陽性細菌都有良好抗菌作用,對各種腸桿菌科細菌如大腸埃希菌、克雷伯菌屬、變形桿菌屬、沙門菌屬、志賀菌屬、腸桿菌屬、沙雷菌屬及銅綠假單胞菌等有良好抗菌作用,奈瑟菌屬和流感嗜血桿菌對該品中度敏感。對布魯菌屬、鼠疫桿菌、不動桿菌屬、胎兒彎曲菌也有一定作用。對葡萄球菌屬(包括金黃色葡萄球菌和凝固酶陰性葡萄球菌)中甲氧西林敏感菌株的約80%有良好抗菌作用,但甲氧西林耐藥株則對該品多數耐藥。對鏈球菌屬和肺炎鏈球菌的作用較差,腸球菌屬則對該品大多耐藥,硫酸慶大霉素與β內酰胺類合用時,多數可獲得協同抗菌作用。

硫酸慶大霉素的制備

制備[1]

硫酸慶大霉素的制備方法,包括以下步驟:

1)取慶大霉素沙土孢子置于孢子斜面培養基上進行孢子培養,培養溫度為36℃,培養時間為10天,得到斜面培養后的慶大霉素孢子;

慶大霉素沙土孢子的制備方法為:

a、沙土孢子培養基的配方按重量百分比計為:可溶性淀粉1.0%,氯化鈉(NaCl)0.05%,硝酸鉀(KNO3)0.1%,碳酸鈣(CaCO3)0.1%,磷酸氫二鉀(K2HPO4)0.02%,麩皮1.8%,硫酸鎂(MgSO4)0.02%,瓊脂2.0%,余量為水(本實施例具體為可溶性淀粉1.0g,氯化鈉(NaCl)0.05g,硝酸鉀(KNO3)0.1g,碳酸鈣(CaCO3)0.1g,磷酸氫二鉀(K2HPO4)0.02g,麩皮1.8g,硫酸鎂(MgSO4)0.02g,瓊脂2.0g,水94.91g);配制好的沙土孢子培養基在每個茄子瓶中分裝50ml,經溫熱滅菌后,斜放,凝固,溫熱滅菌條件為0.1MPa,30分鐘;

b、于超凈工作臺上,在火焰保護下,用無菌接種棒挑取砂土孢子0.1g于茄子瓶斜面培養基內,先劃中線,而后從下而上往兩邊劃線,均勻鋪開,塞好棉塞;

c、培養與保存:接種好的斜面包扎好后,37℃恒溫室架上培養10天,培養好的孢子斜面,4℃冰箱儲存待用;

孢子斜面培養基的配方按重量百分比計為:可溶性淀粉1.0%,氯化鈉0.05%,硝酸鉀0.1%,碳酸鈣0.1%,磷酸氫二鉀0.02%,麩皮1.8%,硫酸鎂0.02%,瓊脂2.0%,余量為水(本方法具體為可溶性淀粉1.0g,氯化鈉0.05g,硝酸鉀0.1g,碳酸鈣0.1g,磷酸氫二鉀0.02g,麩皮1.8g,硫酸鎂0.02g,瓊脂2.0g,水94.91g);

2)將步驟1)中得到的斜面培養后的慶大霉素孢子進行搖瓶培養,搖瓶培養的孢子接入量為:孢子斜面挖取0.25cm2接入一個搖瓶,培養溫度為36℃,培養時間為42小時,得到慶大霉素搖瓶菌絲;

搖瓶培養基的配方按重量百分比計為:可溶性淀粉1.0%,氯化鈉0.05%,硝酸鉀0.1%,碳酸鈣0.1%,磷酸氫二鉀0.02%,麩皮1.8%,硫酸鎂0.02%,瓊脂2.0%,余量為水(本方法具體為可溶性淀粉1.0g,氯化鈉0.05g,硝酸鉀0.1g,碳酸鈣0.1g,磷酸氫二鉀0.02g,麩皮1.8g,硫酸鎂0.02g,瓊脂2.0g,水94.91g);

3)將步驟2)得到的慶大霉素搖瓶菌絲置于種子培養基上進行種子培養,種子培養的接入量為:慶大霉素搖瓶菌絲按種子培養基體積的千分之二接入搖瓶種子,培養溫度為36℃,培養時間為48小時,得到慶大霉素種子培養物;

種子培養基的配方按重量百分比計為:淀粉1.5%,玉米粉1.5%,黃豆餅粉1.0%,硝酸鉀0.05%,蛋白胨0.2%,二氯化鈷(CoCl2)0.0005%,余量為水(本方法具體為淀粉1.5g,玉米粉1.5g,黃豆餅粉1.0g,硝酸鉀0.05g,蛋白胨0.2g,二氯化鈷(CoCl2)0.0005g,水為95.7495g);

4)將步驟3)得到的慶大霉素種子培養物置于繁殖罐中進行擴大培養,慶大霉素種子培養物接入量為擴大培養基體積的20%,培養溫度為36℃,培養時間為42小時,得到慶大霉素繁殖培養物;

擴大培養基的配方按重量百分比計為:淀粉1.5%,玉米粉1.5%,黃豆餅粉1%,硝酸鉀0.05%,蛋白胨0.2%,二氯化鈷(CoCl2)0.0005%,余量為水(本方法具體為淀粉1.5g,玉米粉1.5g,黃豆餅粉1.0g,硝酸鉀0.05g,蛋白胨0.2g,二氯化鈷(CoCl2)0.0005g,水為95.7495g);

5)將步驟4)得到的慶大霉素繁殖培養物置于發酵培養基上進行發酵,慶大霉素繁殖培養物的接入量為發酵培養基體積的20%,發酵溫度為34℃,發酵時間為120小時,得到慶大霉素發酵產物;

發酵培養基的配方按重量百分比計為:淀粉4.5%,黃豆餅粉3.5%,玉米粉1.0%,碳酸鈣0.7%,蛋白胨0.3%,二氯化鈷(CoCl2)0.0015%,硝酸鉀0.01%,硫酸銨0.1%,泡敵0.01%,余量為水(本方法具體為淀粉4.5g,黃豆餅粉3.5g,玉米粉1.0g,碳酸鈣0.7g,蛋白胨0.3g,二氯化鈷(CoCl2)0.0015g,硝酸鉀0.01g,硫酸銨0.1g,泡敵0.01g,水為89.8785g);

6)將步驟5)得到的慶大霉素發酵產物進行酸化處理至pH值為2?3,得到慶大霉素酸化液;酸化處理是以濃度30%的鹽酸進行處理,調pH2~3;

7)將步驟6)得到的慶大霉素酸化液進行中和處理,處理后得到pH值為6.8的慶大霉素溶液;中和處理是以濃度40%的氫氧化鈉進行處理,調pH6.8;

8)將步驟7)得到的慶大霉素溶液以732樹脂進行吸附處理,得到吸附后慶大霉素溶液;吸附處理所用的732樹脂為001×7強酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂;

9)將步驟8)得到的吸附后慶大霉素溶液上柱去除Ca2+、Mg2+、Cl?1,得到去除離子的慶大霉素溶液;去除Ca2+、Mg2+、Cl?1的柱子為Φ1m高2m柱;

10)將步驟9)得到的去除離子的慶大霉素溶液通過飽和樹脂后以質量百分含量為4.5%的氨水進行解析,得到慶大霉素解析液;所述飽和樹脂是指每毫升樹脂吸附了8萬單位慶大霉素得到的樹脂;

11)將步驟10)得到的慶大霉素解析液以711樹脂進行脫色,得到慶大霉素脫色液;脫色處理所用的711樹脂為強堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂;

12)將步驟11)得到的慶大霉素脫色液以薄膜進行濃縮,得到慶大霉素濃縮液;濃縮量為500L/h,濃縮至原來的1/7;

13)將步驟12)得到的慶大霉素濃縮液加入硫酸后制得硫酸慶大霉素;硫酸的濃度為98%,調至pH5.3;

14)將步驟13)得到硫酸慶大霉素通過噴霧干燥制得硫酸慶大霉素成品,噴霧干燥的條件為進風溫度130℃,出風溫度85℃,噴速100L/h。

參考文獻

[1][中國發明,中國發明授權]CN201310099477.5硫酸慶大霉素的制備方法

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