1405-41-0 / 硫酸慶大霉素的應用及制備方法

背景及概述^[1][2]

硫酸慶大霉素是獸醫臨床中治療細菌感染重要抗生素之一，自20 世紀60 年代硫酸慶大霉素首次進入臨床，因其抗菌譜廣、抗菌活性強，在獸醫臨床上用于治療各種桿菌、銅綠假單胞菌、革蘭氏陽性球菌等敏感菌引起的各種疾病，并被用做動物飼料添加劑廣泛應用于動物飼養過程中。現階段，我國已成為硫酸慶大霉素的主要生產國，尤其在獸醫臨床中硫酸慶大霉素所用的制劑種類豐富，應用也較廣泛。

應用^[1,3]

臨床多用于革蘭陰性菌引起的呼吸道、腸道、膽道、泌尿生殖系統、皮膚軟組織等感染或局部感染。本品點眼治療眼部感染。此外，硫酸慶大霉素在獸醫臨床中的應用

1）家禽：采用復方慶大霉素可溶性粉治療雛雞大腸桿菌病，其治愈率為95%，相對增重率為98.05%，療效明顯優于硫酸鏈霉素和強力霉素。通過藥敏試驗發現硫酸慶大霉素對副雞嗜血桿菌高度敏感，治療效果確切，治愈率高達98%。措毛

2）豬：對初生的仔豬采用灌服硫酸慶大霉素注射液，每次2 mL，連續觀察21 d，其仔豬腹瀉發生率為8.61%，遠低于對照組的29.43%，表明硫酸慶大霉素對21 日齡內仔豬腹瀉有較好防治效果。

3）反芻動物：采用硫酸慶大霉素結合rboGMCSF進行奶牛隱性乳房炎治療試驗，其治愈率為50%，明顯優于其他對照組。采用硫酸慶大霉素口服凝膠止瀉劑（8 mg/kg）對腹瀉犢牦牛進行治療，其有效率為87.5%，治愈率為75%，且治療后腹瀉犢牦牛血液中Ca2 + 和血清白蛋白（ALB）含量恢復正常。

4）其他動物：采用硫酸慶大霉素結合補中益氣丸對犬脾虛泄瀉證的臨床治療效果進行評價，結果表明，治愈率為87.5%，治愈后白細胞、紅細胞、血紅蛋恢復較快，和空白組相比，療效更加確切。

藥理作用 ^[3]

本品是一種氨基糖苷類藥物，在細菌體內核糖體發揮作用，抑制細菌蛋白質合成，并影響細菌細胞膜的完整性。本品對革蘭陰性和陽性細菌均有作用，在革蘭陰性菌中，對大腸桿菌、產氣桿菌、克雷伯桿菌、奇異變形桿菌、某些吲哚陽性變形桿菌、綠膿桿菌、某些奈瑟菌、某些無色素沙雷桿菌和志賀菌等具有敏感性。在革蘭陽性菌中，金黃色葡萄球菌(包括產β-內酰胺酶株)對本品敏感，但臨床多用于革蘭陰性菌的感染。近年來，由于本品的廣泛應用，耐藥菌株逐漸增多，綠膿桿菌、克雷伯桿菌、沙雷桿菌和吲哚陽性變形桿菌對本品的耐藥率甚高。

制備 ^[2]

硫酸慶大霉素的制備方法，包括以下步驟：

1)取慶大霉素沙土孢子置于孢子斜面培養基上進行孢子培養，培養溫度為36℃，培養時間為10天，得到斜面培養后的慶大霉素孢子；慶大霉素沙土孢子的制備方法為：

a、沙土孢子培養基的配方按重量百分比計為：可溶性淀粉1.0％，氯化鈉(NaCl)0.05％，硝酸鉀(KNO3)0.1％，碳酸鈣(CaCO3)0.1％，磷酸氫二鉀(K2HPO4)0.02％，麩皮1.8％，硫酸鎂(MgSO4)0.02％，瓊脂2.0％，余量為水(本實施例具體為可溶性淀粉1.0g，氯化鈉(NaCl)0.05g，硝酸鉀(KNO3)0.1g，碳酸鈣(CaCO3)0.1g，磷酸氫二鉀(K2HPO4) 0.02g，麩皮1.8g，硫酸鎂(MgSO4)0.02g，瓊脂2.0g，水94.91g)；配制好的沙土孢子培養基在每個茄子瓶中分裝50ml，經溫熱滅菌后，斜放，凝固，溫熱滅菌條件為 0.1MPa，30分鐘；

b、于超凈工作臺上，在火焰保護下，用無菌接種棒挑取砂土孢子0.1g于茄子瓶斜面培養基內，先劃中線，而后從下而上往兩邊劃線，均勻鋪開，塞好棉塞；

c、培養與保存：接種好的斜面包扎好后，37℃恒溫室架上培養10天，培養好的孢子斜面，4℃冰箱儲存待用；孢子斜面培養基的配方按重量百分比計為：可溶性淀粉1.0％，氯化鈉0.05％，硝酸鉀 0.1％，碳酸鈣0.1％，磷酸氫二鉀0.02％，麩皮1.8％，硫酸鎂0.02％，瓊脂2.0％，余量為水；

2)將步驟1)中得到的斜面培養后的慶大霉素孢子進行搖瓶培養，搖瓶培養的孢子接入量為：孢子斜面挖取0.25cm2接入一個搖瓶，培養溫度為36℃，培養時間為42小時，得到慶大霉素搖瓶菌絲；搖瓶培養基的配方按重量百分比計為：可溶性淀粉1.0％，氯化鈉0.05％，硝酸鉀0.1％，碳酸鈣0.1％，磷酸氫二鉀0.02％，麩皮1.8％，硫酸鎂0.02％，瓊脂2.0％，余量為水；

3)將步驟2)得到的慶大霉素搖瓶菌絲置于種子培養基上進行種子培養，種子培養的接入量為：慶大霉素搖瓶菌絲按種子培養基體積的千分之二接入搖瓶種子，培養溫度為36 ℃，培養時間為48小時，得到慶大霉素種子培養物；種子培養基的配方按重量百分比計為：淀粉1.5％，玉米粉1.5％，黃豆餅粉1.0％，硝 酸鉀0.05％，蛋白胨0.2％，二氯化鈷(CoCl2)0.0005％，余量為水；

4)將步驟3)得到的慶大霉素種子培養物置于繁殖罐中進行擴大培養，慶大霉素種子培養物接入量為擴大培養基體積的20％，培養溫度為36℃，培養時間為42小時，得到慶 大霉素繁殖培養物；擴大培養基的配方按重量百分比計為：淀粉1.5％，玉米粉1.5％，黃豆餅粉1％，硝酸鉀0.05％，蛋白胨0.2％，二氯化鈷(CoCl2)0.0005％，余量為水；

5)將步驟4)得到的慶大霉素繁殖培養物置于發酵培養基上進行發酵，慶大霉素繁殖培養物的接入量為發酵培養基體積的20％，發酵溫度為34℃，發酵時間為120小時，得到慶大霉素發酵產物；發酵培養基的配方按重量百分比計為：淀粉4.5％，黃豆餅粉3.5％，玉米粉1.0％，碳 酸鈣0.7％，蛋白胨0.3％，二氯化鈷(CoCl2)0.0015％，硝酸鉀0.01％，硫酸銨0.1％，泡敵0.01％，余量為水；

6)將步驟5)得到的慶大霉素發酵產物進行酸化處理至pH值為2?3，得到慶大霉素酸化液；酸化處理是以濃度30％的鹽酸進行處理，調pH2～3；

7)將步驟6)得到的慶大霉素酸化液進行中和處理，處理后得到pH值為6.8的慶大霉素溶液；中和處理是以濃度40％的氫氧化鈉進行處理，調pH6.8；

8)將步驟7)得到的慶大霉素溶液以732樹脂進行吸附處理，得到吸附后慶大霉素溶液；吸附處理所用的732樹脂為001×7強酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂；

9)將步驟8)得到的吸附后慶大霉素溶液上柱去除Ca2+、Mg2+、Cl?1，得到去除離子的慶大霉素溶液；去除Ca2+、Mg2+、Cl?1的柱子為Φ1m高2m柱；

10)將步驟9)得到的去除離子的慶大霉素溶液通過飽和樹脂后以質量百分含量為4.5％ 的氨水進行解析，得到慶大霉素解析液；所述飽和樹脂是指每毫升樹脂吸附了8萬單位慶大霉素得到的樹脂；

11)將步驟10)得到的慶大霉素解析液以711樹脂進行脫色，得到慶大霉素脫色液； 脫色處理所用的711樹脂為強堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂；

12)將步驟11)得到的慶大霉素脫色液以薄膜進行濃縮，得到慶大霉素濃縮液；濃縮量為500L/h，濃縮至原來的1/7；

13)將步驟12)得到的慶大霉素濃縮液加入硫酸后制得硫酸慶大霉素；硫酸的濃度為 98％，調至pH5.3；

14)將步驟13)得到硫酸慶大霉素通過噴霧干燥制得硫酸慶大霉素成品，噴霧干燥的條件為進風溫度130℃，出風溫度85℃，噴速100L/h。

主要參考資料

[1] 硫酸慶大霉素臨床藥效學研究進展

[2] CN201310099477.5硫酸慶大霉素的制備方法

[3] 醫師案頭用藥參考