192569-17-8 / 依普利酮雜質7的制備方法

背景及概述^[1][2]

依普利酮雜質7即11-羥基坎利酮，是合成依普利酮的起始原料。依普利酮主要用于治療原發性高血壓以及心肌梗塞后的心力衰竭的藥物，也是第一個獲準上市的選擇性醛固酮受體阻斷劑。在體內由CYP4503A4代謝，半衰期為4～6小時。依普利酮可用于提高急性心臟病發作后的充血性心力衰竭患者的生存率。

應用^[1]

依普利酮雜質7即化合物A。

制備^[2]

菌種與培養基

菌株 : 赭曲霉( Aspergillus ochraceus) NG0216。

斜面培養基 : PDA 培養基 。

發酵培養基( g/L) : 葡萄糖 10, 玉米漿 15, 酵母膏 1. 0, pH 5. 8, 121 ℃ 0. 1 MPa 滅菌 15 min 。轉化培養基( g/L) : 葡萄糖 5, 玉米漿 15, 酵母膏1. 0, 坎利酮 10, 七水硫酸鎂 0. 9, pH 5. 8, 超聲處理( 12. 4 W/cm²) 10 min 。

步驟如下：

1. 赭曲霉NG0216的培養

孢子接種于斜面,28℃擴增5～7d,擴增孢子制成孢子懸浮液(108個/mL)后按7%接種量,溫度28℃下150r/min培養24h,抽濾得濕菌體,洗滌后備用。

2. 細胞的固定化

聚乙烯醇-硼酸凝膠:8g聚乙烯醇加75mL無菌水,80℃攪拌溶解,冷卻至40℃后與菌懸液(15g濕菌體加25mL無菌水)混合均勻,用8#注射針頭滴入5%硼酸溶液中,4℃放置1h,制成直徑2mm左右的顆粒。卡拉膠凝膠:3g鈉型K-卡拉膠加75mL無菌水,40℃攪拌溶化,30℃保溫;再與30℃保溫的菌懸液(同上)混合均勻,用8#注射針頭滴入0.15mol/LK2SO4溶液中,4℃放置1h,制成直徑約2mm的顆粒。海藻酸鈣凝膠:4%的海藻酸鈉溶液75mL與菌懸液(同上)混合均勻,用8#注射針頭滴入5%的氯化鈣溶液中,靜置固化1h,得到直徑約2mm的顆粒。

3. 固定化細胞轉化方法

分別將“2”中制備的固定化顆粒加入含100mL轉化培養基的500mL搖瓶中,26℃,150r/min轉化48h,過程中控制葡萄糖濃度在2.5～5.0g/L之間。

4. 轉化率的測定

采用文獻的HPLC法測定。

5. 坎利酮及產物溶解度的測定

按文獻的方法測定坎利酮及產物粗品在乙酸乙酯中的溶解度。

6. 產物純品的制備

轉化結束,單層紗布過濾,濾液抽率得到產物粗品,去離子水清洗兩遍后50℃真空干燥,測定轉化率。以溶解度為基礎,稱取一定量粗品于結晶器中,加入100mL乙酸乙酯,攪拌、升溫至55℃完全溶解后在KF-49冷井中控溫漸冷至15℃,放置2h,抽濾晶漿得純化結晶,50℃真空干燥后重結晶多次,得產物純品結晶。

主要參考資料

[1]商艷梅,鄭忠輝,趙淑娟.依普利酮的合成[J].藥學研究,2015,34(06):365-367.

[2]茅燕勇,毛斌,范偉平.固定化赭曲霉NG0216細胞羥基化坎利酮[J].生物加工過程,2005(02):45-49.