19356-17-3/骨化二醇的含量測定和分離純化

背景及概述^[1-2]

骨化二醇(calcifediol)是人體內維生素D3(VD3)在肝臟的VD3羥化酶的作用下轉化而來，對空氣、熱、光敏感，易溶于乙醇等極性有機溶劑，不溶于水。由美國Upjohn公司上世紀八十年代開發上市，用于治療老年人骨質疏松癥等各種慢性骨紊亂，以及與慢性腎衰竭有關的代謝性骨病。

維生素D2和D3被吸收后首先經肝臟維生素D-25羥化酶系統羥基化為25-羥代謝物，即骨化二醇，然后骨化二醇在腎臟經維生素D-Ⅰ羥化酶系統催化，形成1，25-雙羥維生素D3(骨化三醇)，才具有生物活性作用。骨化二醇血藥濃度達峰時間約為4小時，作用持續時間為15～20日，腎功能衰竭時作用時間延長2～3倍。半衰期為10～22日。

用法用量^[1]

口服：初量，每周0.3～0.35mg，分為每日或隔日1次，需要時4周后增加用量。一般每日服0.05～0.1mg或隔日服0.1～0.2mg就有療效。血鈣濃度正常病人隔日服0.02mg，即有效。2歲以上小兒口服：每日0.02～0.05mg;2～10歲，每日0.05mg。10歲以上用量可參照成人用量。

含量測定^[2]

謝洪兵等人報道了快速準確地測定維生素D3微生物轉化液中骨化二醇含量的方法。采用依利特HypersilC18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm),流動相為乙腈-水(85∶15),流速2.0mL·min^-1,柱溫50℃,檢測波長265nm,外標法定量。結果：骨化二醇在10.1~2020μg·mL^-1內呈良好線性關系,r=0.9999,定量限0.6ng,檢出限0.3ng,平均加樣回收率為101.06%(RSD1.44%,n=9)。結論：該方法簡便,準確,靈敏度高,分離度好,可用于VD3微生物轉化生產中定量骨化二醇的要求。

分離純化^[3]

（1）、在微生物酶催化維生素D3生成骨化二醇（25-羥基維生素D3）轉化液中，按照體積比1:1加入乙酸乙酯，震蕩萃取1h，收集上層有機溶劑，得到骨化二醇提取液a。

（2）、將上述骨化二醇提取液a，經過減壓濃縮，回收乙酸乙酯，用甲醇重新溶解濃縮物，調整骨化二醇濃度在0.5mg/L，得到上柱溶液b。

（3）、瓊脂糖凝膠過濾層析經活化后，采用濕法裝柱，將上柱溶液b以2BV/h的流速通過瓊脂糖凝膠過濾層析柱，選用層析分子量為400Da，以1BV的乙酸乙酯做為洗脫液，以2BV/h的流速對其進行洗脫，收集洗脫液，在60℃，壓力-0.08MPa條件下，減壓濃縮，干燥，得到純度32.1%的骨化二醇產品。

參考文獻

[1]實用藥物手冊

[2]謝洪兵,曾志剛,翟龍飛.反相高效液相色譜法測定維生素D_3微生物轉化液中骨化二醇含量[J].中國藥學雜志,2015,50(01):72-74.

[3] [中國發明,中國發明授權] CN201910121462.1 一種新型骨化二醇（25-羥基維生素D3）分離純化方法