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4’,6-二脒基-2-苯基吲哚二鹽酸鹽(4’,6-Diamidino-2-phenylindoledihydrochloride，簡稱DAPI，CAS:28718-90-3)，是一種重要的熒光染料。其常用于細胞凋亡檢測，對細胞染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測，也用于普通細胞核染色及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。4’,6-二脒基-2-苯基吲哚二鹽酸鹽可穿透細胞膜與細胞核雙鏈DNA結合發揮標記作用，產生比自身強20多倍熒光，對雙鏈DNA的染色靈敏度要比經典染色劑溴化乙啶高很多倍。其對細胞染色后在顯微鏡下看顯藍色熒光細胞，熒光效率幾乎為100％，且對活細胞無毒副作用。
室溫攪拌下，向5L反應瓶中依次加入6-氯吲哚(303.18g，2.0mol)和1.5L乙二醇二乙醚，攪勻；再向其中加入氯化鎳(5.18g，0.04mol)，三氯化鋁(13.33g，0.1mol)，4,4'-二甲基-2,2'-聯吡啶(18.42g，0.1mol)，鋅粉(65.39g，1mol)，甲酰胺(180.16g，4.0mol)，攪勻。加完后，在100℃反應10小時，反應完成。
反應液冷卻至40℃，過濾，濾除不溶物。濾液減壓蒸餾回收大部分溶劑，剩余物倒入2L水中，用3x 1L乙酸乙酯萃取。合并萃取液，用食鹽水洗滌，萃取液旋干，用甲苯/叔丁基甲醚重結晶得到267.26g白色固體粉末狀產品，收率94％。
室溫攪拌下，向5L反應瓶中依次加入上一步制得的6-氰基吲哚(267.26g，1.88mol)和2L N,N-二甲基乙酰胺，攪勻。再向其中加入4-氯苯甲腈(258.63g，1.88mol)，醋酸鉀(534.52g，3.76mol)，氯[1,3-雙(2,6-二異丙苯基)咪唑-2-亞基]銅(I)(87mg，0.18mmol)，攪勻。反應液加熱至110℃加熱反應6小時，反應完成。
反應液冷卻至室溫，減壓蒸餾回收大部分N,N-二甲基乙酰胺。剩余物加入到2L乙酸乙酯中，用飽和食鹽水洗滌2次，旋干。剩余物用甲苯/叔丁基甲醚重結晶得到416.19g棕黃色固體粉末產品，收率91％。核磁數據：1H NMR(400MHz，D6-DMSO)：δ12.36(s，1H)，8.12(d，2H)，7.98(d，2H)，7.90(s，1H)，7.77(d，1H)，7.38(dd，1H)，7.30(d，1H)。
室溫攪拌下，向5L反應瓶中加入芐醇(1479.36g，13.68mol)，冷卻到0℃，向其中滴加乙酰氯(536.94g，6.84mol)，半小時滴完。滴完后，保溫攪拌1小時。
向反應液中加入上一步制得的6-氰基-2-(4’-氰基苯基)吲哚(416.19g，1.71mol)，加完后，自然升溫至室溫，保溫攪拌12小時，點板確認反應完全。該反應液不經進一步處理，直接進行下一步反應。
向上一步反應液中滴加氯化銨(365.88g，6.84mol)與1.5L乙醇的混合液。滴完后，反應液加熱到60℃，保溫攪拌反應6小時，反應完全。
反應液冷卻至0℃，析出大量黃色固體。過濾，收集濾餅，濾餅用少量18％鹽酸洗滌2次，然后凍干得到533.05g黃色固體粉末狀產品，兩步收率89％。四步反應總收率76％。產品HPLC純度：99.73％。核磁數據：1H NMR(400MHz，D6-DMSO)：δ12.55(s，1H)，9.41(s，2H)，9.29(s，2H)，9.11(s，2H)，8.91(s，2H)，8.22(d，2H)，7.98(d，3H)，7.79(d，1H)，7.47(dd，1H)，7.32(d，1H)。
[1] [中國發明] CN202110294976.4 4’,6-二脒基-2-苯基吲哚二鹽酸鹽的制備方法