28718-90-3 / DAPI溶液的用途和使用方法

背景及概述^[1]

DAPI溶液，也稱DAPI dihydrochloride，是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，和雙鏈DNA結合后可以產生比DAPI自身強20多倍的熒光。和EB(ethidium bromide)相比，對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。因為DAPI是含有特定AT序列DNA的一種嵌入劑，它能像Hoechst染料一樣粘附在DNA雙螺旋的小溝區。

盡管DAPI不能通過活細胞膜，但卻能穿透擾亂的細胞膜而對核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用來檢測酵母線粒體DNA，葉綠體DNA，病毒DNA，microplasm DNA以及染色體DNA。DAPI-DNA復合物的激發和發射波長分別為360nm和460nm。

DAPI染色常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。DAPI也常用于普通的細胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。

DAPI溶液使用過程^[1]

1、用1mLddH₂O將DAPI溶解，制得2.9mM的DAPI溶液（1mgDAPI/1mL H2O）。

注：DAPI不能直接用PBS等緩沖溶液溶解，需要先用水將其溶解。

2、取適量DAPI水溶液加到PBS中，制備成10~50µM的DAPI溶液。 推薦以下PBS的配制方法： 將8.00g NaCl、0.20g KCl、2.9g Na₂HPO₄·12H₂O、0.2g KH₂PO₄溶解于1L純水中。

3、將1/10培養基體積的DAPI溶液加入到細胞培養基中。也可以1/10濃度的DAPI緩沖液代替培養基。

4、在37℃培養細胞10~20分鐘。

5、用PBS或合適的緩沖液洗細胞兩次。

6、用帶有360nm激發波長，460nm發射波長的濾光片的熒光顯微鏡觀察細胞。

應用舉例^[2-3]

CN201910732262.X公開了一種快速鑒別人源細胞和小鼠源細胞的方法，包括步驟：提供人源性/小鼠源性鑒定樣本，用DAPI溶液孵育，再清洗樣本，然后在熒光顯微鏡下進行觀察鑒別：細胞核存在DAPI聚集斑的是小鼠來源樣本，細胞核無DAPI聚集斑的樣本來源于人。本發明在試劑和材料方面的損耗成本低廉，在熒光顯微鏡下即可進行觀察實驗，成本大概在20元/樣，普通實驗室均可以輕易實現；本發明鑒別操作流程簡單，一般實驗者均可輕易掌握操作；實驗結果可以在半個小時內即可得出，極大減少了時間成本；該方法彌補了現有技術的缺陷，可以在普通實驗室進行人源樣本和小鼠源樣本的快速分辨，有效增強實驗室樣本鑒別頻率，避免交叉污染、減少不必要的損失。

CN201410059881.4報道了一種采用雙核法檢測卷煙主流煙氣總粒相物遺傳毒性的方法，其特征在于：選用人支氣管上皮細胞系BEAS-2B細胞作為評價體系，將細胞接種于培養皿中，加入卷煙煙氣總粒相物樣品進行暴露，暴露過的細胞經培養和甲醇溶液固定，采用DAPI溶液染色并在熒光顯微鏡下拍照計數，每個樣品計數1000個雙核細胞中含微核的細胞數量，與對照樣品相比，通過分析微核增加的數量，進而判斷煙氣遺傳毒性的大小。本發明采用煙氣作用于人體的靶器官來源細胞進行卷煙煙氣遺傳毒性評價，針對性更強；實驗過程中無需加入代謝活化體系(大鼠肝S9混合液)，熒光染色直接在細胞培養皿中進行無需轉移至載玻片，具有操作簡便，靈敏度高，結果可靠等特點。

注意事項^[1]

1、DAPI對人體有一定刺激性，請注意適當防護。

2、熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當天完成檢測。

3、為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

主要參考資料

[1]DAPI溶液配制與使用方法

[2]CN201910732262.X一種鑒別人源細胞和小鼠源細胞的方法

[3]CN201410059881.4采用雙核法檢測卷煙主流煙氣總粒相物遺傳毒性的方法