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葛根是豆科植物甘葛藤(粉葛)PuerariathomsoniiBenth.或野葛Puerarialobata(Willd.)Ohwi.的根。味甘、辛，性涼。歸脾、胃、肺經。有解肌退熱、透疹、生津止渴、升陽止瀉、通經活絡、解酒毒之功效。常用于外感頭痛發熱、項背強痛、麻疹不透、口渴、消渴、熱痢、泄瀉、眩暈頭痛、中風偏癱、胸痹心痛、酒毒傷中。葛根中含有多種有效成分，主要為葛根素。葛根素中文別名8-beta-D-葡萄吡喃糖-4',7-二羥基異黃酮，英文名稱：puerarin，CAS號：3681-99-0，分子式：C21H20O9，分子量：416.378，密度：1.642g/cm3，沸點：791.2ºCat760mmHg，熔點：187-189°C。近代有關研究表明，葛根素對突發性耳聾以及心腦血管疾病等有較好的療效。用于擴張血管，改善血液循環；降低心肌耗氧量，抑制癌細胞；增加冠脈流量，調整血液微循環；治療各年齡階段的突發性耳聾；降低心腦血管疾病危險。隨著人們對葛根的藥理作用進行深入研究，將其當作原料加工制作的各類食品藥品廣受國內外民眾好評。
目前常用于葛根素提取的方法有醇提法、水提法、微波輔助萃取法、超聲波輔助法等[1]。
1.1儀器TU－1901雙光束紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限公司);電子天平TA1003(上海菁海儀器有限公司);HH－2恒溫水浴鍋(常州市江南實驗儀器廠);N－1300旋轉蒸發儀(EYEL4)。
1.2試藥葛根飲片購于國藥控股國大藥房內蒙古有限公司，用粉碎機超微粉化后，用密封袋分兩次包裝備用;葛根素標準品(來源于中國食品藥品檢定研究院)。95%乙醇、實驗過程中所用蒸餾水、無水乙醇。
精密稱量葛根素標準品10mg，置于50mL的容量瓶中，加30%乙醇定容，即配制成質量濃度為0.2mg/mL的葛根素標準品溶液。分別精密吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL置于25mL容量瓶中，加30%乙醇定容。以30%乙醇作空白對照，在波長為250nm處測定吸光度，并繪制吸光度和質量濃度的標準曲線。
2.2.1乙醇濃度對葛根素提取率的影響精密稱取3份10.000g的葛根粉，分別加入相95%乙醇、75%乙醇和50%乙醇(固液比1∶20g/mL)，在90℃恒溫水浴下用索氏提取器回流提取60min，所得溶液用旋轉蒸發儀除去溶劑后用30%乙醇稀釋，取樣，在250nm處測定吸光度并記錄數據。
2.2.2提取時間對葛根素提取率的影響稱取3份10.000g的葛根粉，按照固液比1∶20(g/mL)加入相應量的95%乙醇，在90℃恒溫水浴下分別用索氏提取器回流提取90min、75min、60min，所得溶液用旋轉蒸發儀除去溶劑后用30%乙醇稀釋，取樣，在250nm處測定吸光度并記錄數據。
2.2.3提取溫度對葛根素提取率的影響稱取3份10.000g的葛根粉，按照固液比1∶20(g/mL)加入相應量的95%乙醇，分別在90℃、85℃、80℃恒溫水浴下用索氏提取器回流提取60min，所得溶液用旋轉蒸發儀除去溶劑后用30%乙醇稀釋，取樣，在250nm處測定吸光度并記錄數據。
2.2.4乙醇濃度對葛根素提取率的影響稱取3份10.000g的葛根粉，分別按照固液比1∶15、1∶20、1∶25(g/mL)加入相應量的95%乙醇，在90℃恒溫水浴下用索氏提取器回流提取60min，所得溶液用旋轉蒸發儀除去溶劑后用30%乙醇稀釋，取樣，在250nm處測定吸光度并記錄數據。
2.3正交試驗葛根素提取的因素很多，通過單因素試驗確定了各因素的最優水平。但考慮到各因素之間的相互影響，以紫外分光光度法測得的葛根素含量為參考指標，采用正交L9(34)試驗設計，研究葛根素的最佳提取條件。
2.4葛根素標準曲線以葛根素質量吸光度為縱坐標、濃度為橫坐標，可獲得線性回歸方程:y=0.1313x－0.101(Ｒ2=0.9982)式中:y為吸光度;x為質量濃度(μg/mL)。結果表明，葛根素質量濃度在1.6～9.6μg/mL范圍內，線性關系良好。
圖1 葛根素標準曲線圖
2.5.1乙醇濃度對葛根素提取率的影響選擇最合適的溶劑從樣品基質中提取目標分析物是開發提取方法的基礎步驟。離子液體作為一種環境友好的綠色溶劑，在過去的幾十年中得到了越來越多的關注。然而，離子液體也有一些缺點，包括太昂貴而不能大規模用于商業生產，難以再生和有一些毒性等。為此，對不同濃度乙醇對葛根素提取率的影響進行研究。前人對不同乙醇濃度下超聲法提取葛根素的提取率進行了研究，發現50%乙醇才是最佳選擇。當乙醇濃度為75%時提取出的葛根素濃度最高，由此可知，增加乙醇濃度可以提高提取效率。
2.5.2提取時間對葛根素提取率的影響。隨著提取時間的延長，葛根素的提取率75min達到最大值，隨后提取時間越長，提取率越低，這可能是由于在較長時間的加熱過程中部分葛根素被破壞所致。而前人同樣對不同提取時間下超聲法提取葛根素的提取率進行了研究，發現75min是最優選擇。
2.5.3提取溫度對葛根素提取率的影響，在85℃溫度時，葛根素的產率達到頂峰，這可能是由于升高溫度導致細胞基質的打開，從而提高葛根素的提取效率，也可能是在高溫下，溶劑粘度降低，擴散系數增大，從而提高了提取效率。而在90℃時，葛根素的產率反而下降，這可能是高溫下葛根素的分解和燒焦所致。而前人同樣對不同溫度下超聲法提取葛根素的提取率進行了研究，發現85℃是最優工藝條件。
2.5.4固液比對葛根素提取率的影響固液比是提高葛根素提取率的一個重要因素。一般來說，溶劑體積越大，提取率越高，然而較高的溶劑體積會使操作困難，導致不必要的浪費。采用不同的固液比進行了一系列實驗，以評價固液比的影響。葛根素提取率在固液比1∶25時達到頂峰。
2.6正交試驗對數據進行極差分析可得，極差最大的因素是乙醇濃度，葛根素濃度提取率最高的乙醇濃度為75%，這與單因素試驗的結果一致，說明乙醇濃度的最佳選擇為75%;其次是提取溫度，根據上述結果，單因素試驗確定在85℃時葛根素提取率最高，而由于各因素間的相互作用，正交試驗最終決定采用90℃作為最佳提取溫度;再次是固液比，從單因素試驗結果可以看出，葛根素提取率在固液比1∶20時達到頂峰，但同樣由于各因素間的相互作用，同時考慮到試驗誤差的影響，最終選用1∶25為最佳固液比;極差最小的因素是提取時間，單因素試驗與正交試驗一致得出了提取時間為75min時提取效果最佳。綜上所述，在乙醇濃度為75%、提取溫度為90℃、固液比為1∶25的條件下提取75min所得葛根素濃度最高，提取率最高。
葛根素的最優乙醇熱回流法提取工藝為在乙醇濃度為75%、提取溫度為 90℃、固液比為 1∶25 的條件下提取 75 min。
[1]賴玲．葛根的研究進展［J］．海峽藥學，2013，25(1):10-14．