38748-32-2 / 雷公藤甲素的幾種制備方法

背景及概述^[1]

雷公藤甲素(triptolide)是從雷公藤中分離出的活性最高的環氧化二萜內酯化合物，是雷公藤的主要有效成分之一，其相關效價比雷公藤總苷高100-200倍。經藥理和臨床試驗表明， 其具有確切的免疫抑制、抗炎、抗生育及抗腫瘤等生物活性。

制備^[1-2]

報道一、

雷公藤藥材300公斤(經檢測，其雷公藤甲素含量為0.0043％)，粉碎至20～30目，裝入 提取罐，加入3噸乙酸乙酯，再加入360g抗壞血酸，加熱回流提取3次，每次5小時，提取 液經過濾、減壓濃縮得浸膏8.3公斤；用360升二氯甲烷溶解浸膏，打入萃取罐，另稱取17.28 公斤NaOH，配制720升0.6moL/LNaOH溶液，分2次打入萃取罐，對二氯甲烷溶解液進行 堿洗2次，濃縮二氯甲烷相得堿洗后浸膏2公斤；取10公斤200～300目青島海洋柱層析正相 硅膠，濕法裝直徑35cm柱，堿洗后浸膏上樣后先用二氯甲烷洗脫，待洗脫液顏色變淡后用 二氯甲烷:甲醇＝50:1混合溶劑洗脫2個柱體積，然后用甲醇洗脫，濃縮甲醇洗脫液得甲 醇洗脫物427g；取20公斤200～300目青島海洋柱層析正相硅膠，濕法裝直徑50cm柱，甲醇 洗脫物上樣后依次用石油醚:乙酸乙酯＝10:1、6:1、4:1、2:1、1:1(體積比)的混合 溶劑進行梯度洗脫，每個比例洗脫約8個柱體積，收集含雷公藤甲素的洗脫液，濃縮至約1/8 體積后4℃下靜置析晶，得雷公藤甲素粗品13.8g；將粗品用異丙醚作結晶溶劑在室溫下進行 重結晶，結晶完畢后過濾得雷公藤甲素純品12.3g，HPLC檢測其純度為99.4％。

報道二、

1)超聲強化提取：取雷公藤莖1.0kg，干燥粉碎后過60目篩，然后取100克粉末 放入2500mL錐形瓶中，按固液比1：10(W/V)加入乙醇/水/1-乙基-3-甲基咪唑溴鹽(4： 1：5，V/V/V)的混合物，于超聲功率密度50W/cm2，超聲頻率50kHz，溫度45℃條 件下，超聲提取20min，經固液分離得到含雷公藤甲素和雷公藤乙素的提取液。

2)有機溶劑萃取：將石油醚加入到上述步驟1)得到的提取液中，按提取液與石油 醚的體積比5：1萃取3次，分離有機相得雷公藤甲素和雷公藤乙素萃取相，然后將得到 的有機萃取相在50℃下減壓濃縮至近干，得到含有雷公藤甲素和雷公藤乙素的黃色粗 品。萃取余液循環使用，該萃取余液的主要成分為離子液體Ⅰ(1-乙基-3-甲基咪唑溴鹽)。

3)HSCCC分離純化：稱取步驟2)得到的雷公藤甲素和雷公藤乙素的黃色粗品500 mg，選擇甲基叔丁基醚-正丁醇-乙腈-水-1-烯丙基-3-甲基咪唑溴鹽(2：3：3：4∶0.05， V/V)作為HSCCC溶劑體系，將250mL的HSCCC溶劑體系以及上述雷公藤黃色粗品分 別加入分液漏斗中，震蕩使溶液充分混合，放置過夜，分相平衡后分出上相和下相。以 溶劑體系的上相為固定相，下相為流動相，調整轉速為750r/min，柱溫為30℃，用高速 逆流色譜儀(上海同田生物技術有限公司生產的TBE-1000A型)以5.0mL/min流速泵入 HSCCC螺旋管，根據檢測器的譜圖分步收集目標物，分別獲得雷公藤甲素和雷公藤乙 素的溶液。

4)真空冷凍干燥：將步驟3)得到的收集液，預凍溫度-25℃，工作壓力25Pa， 升華溫度50℃，解析溫度65℃，得到純度大于95％的雷公藤甲素和雷公藤乙素。

檢測采用Agilent 1100series高效液相色譜儀，色譜柱為AccQ.Tag C18柱(150mm×3.9 mm i.d.,5μm，Waters,Milford,MA,USA)，流動相為0.05％(v/v)醋酸-醋酸銨溶液(5 mmol/L)/乙腈/甲醇(60：30：10，V/V/V)，流速為0.6mL/min，紫外檢測器在220nm波長 下進行檢測，雷公藤甲素和雷公藤乙素的純度均大于95％。

參考文獻

[1] [中國發明,中國發明授權] CN201510213692.2 一種雷公藤甲素的提取制備方法

[2] [中國發明,中國發明授權] CN201510117363.8 一種利用離子液體高效提取雷公藤甲素和乙素的方法【公開】/一種利用離子液體提取雷公藤甲素和乙素的方法【授權】