437-74-1/煙酸占替諾的應用

背景及概述^[1][2]

煙酸占替諾是一種安全、有效、副作用小的黃嘌呤類血管擴張劑，化學名稱為7?[2?羥基?3-（2?羥乙基?甲氨基）]茶堿煙酸鹽。煙酸占替諾可直接作用于小動脈平滑肌及毛細血管，使血管擴張，改善血液流變學，減少周圍血管的阻力，促進葡萄糖透過血腦屏障，增強腦細胞的葡萄糖和氧的利用，改善大腦的糖代謝和大腦功能。還有促進脂肪代謝，降低高血脂、高膽固醇和高纖維蛋白原的作用。

適用于治療腦血管障礙性疾病（如腦血栓形成、腦栓塞、腦外傷后遺癥、腦手術后遺癥、中風后遺癥、頸動脈阻塞所致的缺氧性腦軟化癥、老年腦功能 障礙等）、冠心病、狹心癥、心肌梗塞后（預防復發）、心肌炎、偏頭痛、耳病性眩暈癥、肢端動脈痙攣癥、間歇跛行癥、糖尿病性壞疽、血栓性靜脈炎、靜脈曲張 潰瘍、肺栓塞、褥瘡、凍瘡和高血脂等。

制備^[1]

1. 煙酸占替諾粗品制備

向氯代物反應罐中加入環氧氯丙烷29.4kg和無水乙醇12.8kg，開攪拌，降溫，當罐內溫度降至20℃以下時，滴加N?甲基乙醇胺25.5kg，使內溫保持在18?22℃。滴加完畢在18?25℃保溫反應2小時，待用。將無水乙醇215kg抽入中和罐中，開攪拌加入氫氧化鈉12.1kg升溫至55℃左右，緩慢加入茶堿52.1kg。升溫，回流時緩慢勻速滴加氯代物，加畢保溫回流1.5小時后，降溫抽濾，濾液抽至反應罐，升溫至回流，加入煙酸33.8kg，繼續回流30分鐘。反應完畢冰鹽水降溫至10℃，5?10℃保溫2小時，甩濾。濾餅在60?70℃進行真空干燥，真空度為0.080?0.085MPa，得煙酸占替諾粗品。

2. 煙酸占替諾粗品精制

向精制罐中抽入95%乙醇360kg，開攪拌，加入粗品60kg，升溫，回流至全溶后，加入普通活性炭1.8kg，回流30分鐘，降溫，壓濾至結晶罐，冰鹽水降溫至5℃，0?5℃保溫6小時。甩濾，濾餅在60?70℃進行真空干燥，真空度為0.080?0.085MPa，得煙酸占替諾成品，純度為92%，收率為83%。

制劑^[2]

一種所述的煙酸占替諾凍干粉針的制備方法，包括以下步驟：

(1)在10～20℃溫度下，依次將羥丙基-β-環糊精、甘露醇和煙酸占替諾溶解于注 射用水中，然后用氫氧化鈉水溶液調節pH至6.1～6.5，再加入活性炭充分攪拌后，經過過濾 除炭和過濾除菌得到半成品原液；

(2)將步驟(1)得到的半成品原液分裝后放入凍干箱中，經過如下凍干過程得到所述的煙酸占替諾凍干粉針：

(a)預凍：在-30℃～-40℃時預凍1-3小時；

(b)升華：在小于14Pa的壓力下，0℃～-10℃時進行升華，直到冰晶消失后再保持 1-5小時；

(c)加熱干燥：升溫至20℃～25℃并在該溫度范圍保持1-5小時進行加熱干燥，得到成品。

檢測^[3]

液質聯用檢測中成藥及保健食品中煙酸占替諾：

(1)制備對照品溶液：取煙酸占替諾對照品用甲醇溶解配制成濃度為1mg/ml的煙 酸占替諾溶液，然后取1ml煙酸占替諾溶液制量瓶中，用甲醇定容至100ml，得到煙酸占替諾 對照品溶液。

(2)制備待測樣品溶液：液體制劑的配置方法：精密吸取相當一次口服劑量，置 50ml量瓶中，加入20ml 50％甲醇水溶液，于1130W，37kHz條件下下超聲處理15min，放冷，用 50％甲醇水溶液定容至刻度，搖勻，取1ml溶液加水稀釋10倍，作為供試品溶液待用。

固體制劑的配置方法：取固體制劑供試品研細，精密稱取相當于一次口服劑量，置 100ml錐形瓶中，精密加入50ml 50％甲醇水溶液，稱重，于1130W，37kHz條件下下超聲處理 15min，放冷，用50％甲醇水溶液補足重量，取1ml上清液加水稀釋10倍，作為供試品溶液待用。

軟膠囊制劑的配置方法：精密稱取相當于一次口服劑量軟膠囊，置100ml錐形瓶 中，精密加入50ml 50％甲醇水溶液，稱重，于1130W，37kHz條件下下超聲處理15min，放冷， 用50％甲醇水溶液補足重量，置于4℃冰箱放置2.5h，將溶液轉移至離心管，4000r·min^-1離心5min，取1ml上清液加水稀釋10倍，作為供試品溶液待用。

凈化過程如下：精密量取供試品溶液1ml以1ml·min^-1流速通過活化后的C18-SPE 柱，用2ml 50％甲醇-水洗脫，合并流出液與洗脫液，并定容至5ml，用0.22μm有機濾膜過濾， 即得待測樣品溶液。

(3)取對照品溶液和待測樣品溶液上液質聯用儀對供試品溶液中的煙酸占替諾進 行定性定量測定，其中，

色譜條件：3.0mm×100mm，1.8μm，Eclipse XDB C18色譜柱，流速：0.30ml·min^-1， 柱溫：40℃，進樣量:1μl；ESI正模式：流動相A為0.1％甲酸溶液，流動相B為甲醇；梯度洗脫 程序：0～2min，92％A、10％B；2～10min，92％～8％A、8％～92％B；10～13min，10％A、92％ B；在90％A、10％B下平衡2min；ESI負模式：流動相A為水，流動相B為乙腈；梯度洗脫程序：0～0.5min，85％A、15％B；0.5～3min，85％～10％A、15％～90％B；3～5min，15％A、85％B；在 85％A、15％B下平衡2min；

質譜條件：電噴霧離子源(ESI)，正負離子模式，多反應監測(MRM)掃描方式：m/z為 313.1/130.1，碎裂電壓131V，碰撞能20V，保留時間2.1min，干燥氣溫度：360℃，霧化器壓力：40Psi，干燥氣流速：10L·min^-1。

(4)線性關系考察：精密吸取5μg·ml-1煙酸占替諾對照品溶液20，50，80，120，160，200μl，置6個10ml量瓶中，加流動相定容至刻度，搖勻，即得6個濃度水平的混合對照溶液，分別為10，25，40，60，80，100ng·ml^-1，各取1μl，按上述步驟(3)的液質聯用條件進樣分析， 平行測定2次，以峰面積(Y)對質量濃度(X，ng·ml^-1)進行線性回歸，得到回歸方程Y＝22.78X+171.85和相關系數r＝0.9980，表明煙酸占替諾在11.80～135.6ng·ml^-1范圍內線性關系良好。

(5)檢測限將煙酸占替諾對照品溶液逐步稀釋后，按上述步驟(3)的液質聯用條件 測定，按S/N＝3計算各化學成分的檢測限為2ng·ml^-1。

(6)精密度試驗：取煙酸占替諾對照品溶液，濃度為100ng/ml，采用步驟(3)的液質聯用條件進樣6次，結果煙酸占替諾的峰面積的RSD少于2.5％(n＝6)，說明儀器精密度良好。

(7)穩定性試驗：取煙酸占替諾對照品溶液，濃度為100ng/ml，分別在0，1，8，12和 24h按照步驟(3)等液質聯用條件進樣，考察溶液穩定性，結果表明，煙酸占替諾在24h內穩定。

(8)加樣回收率試驗:取1個煙酸占替諾空白樣品，加入煙酸占替諾對照品約50μg，按待測樣品溶液制備方法平行制備6份待測樣品溶液，按上述步驟(3)的液質聯用條件進樣并測定回收率。結果顯示煙酸占替諾的加樣回收率范圍為98％～102％，RSD小于5％(n＝ 6)。

(9)樣品測定：共取口服液4批、軟膠囊6批，硬膠囊3批和片劑2批，按步驟(2)制備待測樣品溶液，按上述步驟(3)液質條件進樣檢測，結果15批樣品中煙酸占替諾均未檢出。

主要參考資料

[1][中國發明,中國發明授權] CN201110022478.0 一種煙酸占替諾的合成方法

[2][中國發明,中國發明授權] CN201510555375.9 煙酸占替諾注射用組合物、煙酸占替諾凍干粉針及其制備方法

[3][中國發明] CN201711365095.7 液質聯用檢測中成藥及保健食品中煙酸占替諾的方法