手機掃碼訪問本站
微信咨詢
煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶和黃嘌呤氧化酶是心肌再灌注過程中自由基的主要來源，因而抑制其活性，減少自由基的生成可能會減輕再灌注損傷。在本實驗中，使用NADPH 氧化酶抑制劑香草乙酮可以對再灌注大鼠心肌發(fā)揮保護作用，這種保護與其抑制NADPH氧化酶的活性，減少其介導(dǎo)的超氧陰離子和過氧化亞硝酸鹽自由基生成有關(guān)。
通過結(jié)扎大鼠冠脈左前降支造成心肌缺血30 min，松扎再灌3h后，觀察到明顯的缺血及再灌注損傷，表現(xiàn)為心臟功能下降、心肌梗死和心肌細(xì)胞凋亡的發(fā)生。進(jìn)一步的分析則表明，再灌注時NADPH氧化酶的活性增加，超氧陰離子生成增加，造成明顯的自由基損傷（以MDA 為證)。對NO和硝基酪氨酸的測定表明，再灌注時NO生成增加，可與同時生成的超氧陰離子反應(yīng)生成毒性更強的過氧化亞硝酸鹽ONOO-，而ONOO-引起蛋白質(zhì)硝基化和其他自由基損傷。
鑒于NADPH氧化酶在再灌注損傷中的關(guān)鍵作用，嘗試抑制其介導(dǎo)的自由基生成以減輕損傷。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的NADPH氧化酶抑制劑有兩種:二亞苯基碘(DPI)和香草乙酮，但 DPI除可抑制NADPH氧化酶外，對其他黃素酶類也有抑制作用。因此，選擇特異性更強的香草乙酮進(jìn)行干預(yù)，香草乙酮可以引起p47phox疏基氧化而妨礙全酶的組裝發(fā)揮抑制作用。結(jié)果中顯示，香草乙酮干預(yù)顯著減輕了再灌注引起的心臟功能下降，心肌梗死面積顯著縮小，心肌細(xì)胞凋亡減輕，證香草乙酮的確可以改善心肌再灌注損傷。進(jìn)一步的機制分析發(fā)現(xiàn)，香草乙酮干預(yù)顯著抑制了再灌注引起的NADPH 氧化酶活性升高，減少了超氧陰離子和MDA生成，表明香草乙酮的保護作用是通過抑制NADPH 氧化酶的活性減少其介導(dǎo)的自由基生成和損傷而發(fā)生的。香草乙酮不影響NO的生成，但通過減少超氧陰離子的生成減少了ONOO-的產(chǎn)生和損傷,使得硝基酪氨酸生成明顯減少，證明其對ONOO損傷也有抑制作用;對心肌MPO活性的測定表明，香草乙酮還可減少心肌中性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞的浸潤，這也可能是其減輕再灌注損傷的途徑之一，但有研究表明香草乙酮并不影響中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的吞噬功能，提示香草乙酮可能是通過抑制中性粒細(xì)胞的趨化和NADPH 氧化酶介導(dǎo)的呼吸爆發(fā)而減輕再灌注損傷的。
綜上所述，香草乙酮可以通過抑制NADPH氧化酶的活性，減少其介導(dǎo)的自由基生成、中性粒細(xì)胞的浸潤而保護心肌，保護心臟功能，減少心肌細(xì)胞凋亡而對心肌再灌注損傷起有效的治療作用。
香草乙酮又稱香莢蘭乙酮,乙酰香草酮，具有弱香草嗅味,不僅用于香料工業(yè)也是重要的有機合成原料,可用于合成精神類藥物伊潘立酮和多種新型抗瘧藥。同時也是一種常用的抗氧化劑是目前公認(rèn)的特異性煙酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶抑制劑,在醫(yī)學(xué)上還常用作強心劑和利尿藥。
在反應(yīng)瓶中依次加入無水乙醇25 mL ,愈創(chuàng)木酚2. 0 mL( 18. 0 mmol),無水碳酸鉀5. 0 g(36.2 mmol)碘化鈉0.3 g ( 2. 0 mmol)和溴代正丙烷3.2 mL( 35. 4 mmol)攪拌下回流反應(yīng)10 h.過濾減壓蒸除乙醇和過量溴代正丙烷加入二氯甲烷40 mL和1 mol-L-1氫氧化鈉溶液30 mL ,分液有機相用水(2 x 25 mL)洗滌,無水硫酸鎂干燥,旋蒸脫溶得黃色液體1 2. 86 g ,收率95.3%;
在反應(yīng)瓶中加入二氯甲烷25 mL和11. 5 g( 9. 0 mmol)攪拌下加入無水氯化鋅2.5 g( 18.3mmol)冰浴冷卻,滴加混合溶液[二氯甲烷（2.0mL) +乙酸酐( 1. 7 mL ,18. 0 mmol)],滴畢緩慢升至室溫反應(yīng)4 h。加入1 mol-L-1鹽酸40 mL ,分液水相用二氯甲烷( 2 x 30 mL)萃取,合并萃取液,用水(2× 30 mL)洗滌,無水硫酸鎂干燥旋蒸脫溶得黃色液體混合物1. 84 g ,收率97.9%，純度99. 1%；
在反應(yīng)瓶中依次加入二氯甲烷16 mL及異構(gòu)體3-甲氧基4-正丙氧基苯乙酮和3-丙氧基4-甲氧基苯乙酮的混合物1.0 g( 4. 8 mmol)攪拌至完全溶解(5min);加入無水三氯化鋁1. 4 g( 10. 5 mmol),于35 ℃反應(yīng)4 h。倒入1 mol-L-1氯化銨溶液(25mL)中分液水相用二氯甲烷( 2 x 30 mL)萃取，合并萃取液旋蒸脫溶后經(jīng)硅膠柱層析[洗脫劑:V(石油醚):V(乙酸乙酯)=10 ∶1分離純化得米白色固體香草乙酮。
[1] Murooch CE，Grieve DJ,Gave AC . NADPH oxidase and heart failure [J. Curr (pin Pharma.2006. 6 (2):148-153.
[2] 周永紅楊曉慧劉紅軍等 利用氧化劑氧化木質(zhì)素制備乙酰丁香酮和香草乙酮的方法[P]. CN 102