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500-44-7/含羞草素的主要應用

背景及概述[1]

1936年,首次報道了含羞草植物中存在含羞草素。銀合歡植物富含多酚氧化物、葉綠素、多糖、蛋白質等,其種子中粗蛋白質含量為30%~32%、含羞草素3%~5%,葉片中粗蛋白質含量為22%~29%、含羞草素3%~6%。銀合歡為世界著名的高蛋白飼料植物,由于葉片富含羞草素,導致禽畜(尤其是非反芻動物)食用銀合歡后常發生脫毛、白內障、生長緩慢及生殖障礙等癥狀,限制了銀合歡在畜牧業上的廣泛應用。但另一方面,含羞草素具有多方面的生理活性,它的某些生理活性已被開發利用,如:工業上用作脫毛劑等。目前,市面上試劑級含羞草素的價格約為每100毫克565元。含羞草素最初是1936年從含羞草中提取得到的,從銀合歡種子取則始于R.Yoshida。1951年建立了測定含羞草素的快速比色法。1965年首次測定不同銀合歡種質葉片和種子中的含羞草素含量。1978年建立了銀合歡葉片含羞草素測定的自動比色法。我國利用氯化鐵法,測定了新銀合歡和肯寧漢姆銀合歡枝和葉片中的含羞草素含量。

制備[1]

一種提取和純化銀合歡葉片含羞草素的方法,該方法包括以下步驟:

第一步:采集銀合歡健康枝條上的第1至3蓬全展葉片,取樣1.0kg;

第二步:將葉片于39℃~40℃烘干至恒重,用粉碎機粉碎過篩后用于含羞草素提取;

第三步:稱取經粉碎過篩的樣品100g,放入1000mL帶塞瓶中,加蒸餾水500mL;

第四步:在帶有可搖擺的恒溫水浴中保溫,先搖擺,再靜置保溫浸提16~17h;

第五步:離心,收集上清液;

第六步:用鹽酸將上清液調至pH5,加入乙醇,混均并在4℃條件下放置2d;

第七步:離心收集上清液,并用真空泵減壓濃縮至20mL,濃縮液在4℃條件下,靜置3d;

第八步:離心收集結晶物,用蒸餾水洗滌,分別離心收集結晶物,室溫條件下真空干燥至恒重;

第九步:取結晶物2g放入500mL燒杯中,加入200mL蒸餾水,加熱直完全溶解。趁熱時,將溶解液轉入裝有粉狀活性炭的過濾柱過濾,并收集濾液;

第十步:將濾液減壓濃縮至100mL,并4℃條件下,靜置3d;

第十一步:離心收集結晶物,用蒸餾水洗滌,室溫真空干燥到恒重,獲得白色晶體。

應用[2]

含羞草素從含羞草或銀合歡中提煉的植物氨基酸。它具有與胸腺嘧啶高度相似的化學結構,可競爭性地與腺嘌呤結合,從而阻礙DNA的合成,使細胞阻滯在G1/S點。研究表明含羞草素能將PC-3細胞阻滯在G1期,LNCaP細胞阻滯在S期。同時,含羞草能夠抑制K562,7402等多種腫瘤細胞生長,并可其誘導凋亡。有實驗以人肝癌QGY-7703細胞株為研究對象,考察含羞草素阻斷對周期同步化的作用。并與胸腺嘧啶脫氧核苷阻斷法相對照,研究含羞草素阻斷去除后對QGY-7703細胞周期的影響。結果顯示:QGY-7703細胞在含羞草素阻斷后釋放的第10h進入S期,第20h進入G2/M期,且最高同步率分別為G1期94.6%,S期86%。含羞草素能較好地使肝癌細胞株QGY-7703同步化于G1期和S期。

毒性及降毒方法[3]

含羞草素是一種氨基酸類毒素,它存在于銀合歡種子、葉片和根系等器官中,并對非反芻動物和瘤胃無降解銀合歡能力的反芻動物有毒。反芻動物銀合歡的典型中毒癥狀包括脫毛、厭食、體重下降、流涎、食道損傷、甲狀腺腫大、血液中甲狀腺素濃度降低、生殖障礙等。通常動物日糧中含5%~10%銀合歡,反芻動物日糧不超過30%,不會引起明顯中毒癥狀。

近年來,國內外對銀合歡進行降毒研究并取得一些成果。陳秀蘭等將銀合歡種子和種仁經水煮1h,含羞草素分別降低57.34%和97.28%,蛋白質分別損失6.06%和14.89%。銀合歡飼料可用內生性降解酶的作用,通過傳統的堆積發酵技術使鮮貯的銀合歡嫩葉含羞草素降解50%。含羞草素易與Fe3+、Al3+、Cu2+、Zn2+等金屬離子熬合,可在銀合歡飼料中加入礦物質使含羞草素失活。將不毒的反芻動物胃液轉灌至易中毒的反芻動物胃中,使后者能完全克服銀合歡毒性。瘤胃細菌降解含羞草素和二羥基吡啶化合物的功能已被證實,首先從瘤胃中分離出具有這種脫毒能力的細菌。在我國廣西潿洲島,從黃牛和山羊瘤胃中亦發現DPH降解菌,并成功地轉灌至廣西大陸的黃牛和山羊瘤胃中。從采食不引起中毒銀合歡的黃牛瘤胃中分離出牛鏈球菌(StreptococcusbovisOrla-Jensen)、生孢梭菌和乳桿菌(LactobacillusBeijerinck)新種能降解含羞草素、3,4-DHP[3-羥基-4-(1氫)吡啶酮,簡稱DHP]和2,3-DHP[2,3-二羥基吡啶],每個菌株都能降解含羞草素和DHP。另外,食用菌絲對含羞草素有明顯的降解作用,用水浸泡去毒,補充血液中的甲狀腺素(T4)或碘等可減輕銀合歡的中毒癥狀。

主要參考資料

[1] CN201310134483.X一種提取和純化銀合歡葉片含羞草素的方法

[2] 含羞草素對肝癌細胞QGY-7703周期同步化的作用

[3] 我國銀合歡研究進展

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