57-91-0 / 雌二醇的制備和含量檢測方法

背景及概述^[1]

雌二醇，[17β-雌二醇或雌-1，3，5(10)-三烯-3，17-二醇，(17-β)]，是分子量為272.38道爾頓的C18甾體激素。它是性激素，稱為“雌性”激素(也存在于雄性中)，其是一組內源甾體中最有效的雌激素，其包括雌酮(E1)和雌三醇(E3)。在女性中，主要由卵巢產生雌二醇，由腎上腺次級產生，并在脂肪組織中將甾體前體轉化至雌激素。雌二醇負責乳腺和生殖上皮的生長以及第二性征的發育。除了促進健康的骨結構和調節女性膽固醇水平外，雌二醇的正常水平提供適當的排卵、受孕和妊娠。在男性中，睪丸和腎上腺是雌二醇的主要來源。雌二醇被需要用于維持激素平衡和其他腺體的功能。

制備^[1]

浮2g(7.4mmol)雌酮在10ml水中，加入0.11g(0.37mmol)二甲基二辛 基氯化銨、0.4g(7.4mmol)KBH4，在油浴55℃中機械攪拌3小時。將反應物過 濾，粗品用甲醇重結晶得到β-雌二醇1.84g，收率91％。m.p.178-179℃，氫核 磁共振譜(400MHz，CDCl3)δ：7.95(m，1H，-OH)，7.06(d，J＝8Hz，1H，1-H) 6.53-6.61(m，2H，2-H，4-H)，3.67(m，1H，17-H)，0.73(s，3H，18-H)。

含量檢測^[2]

一種利用納米金淬滅羅丹明B熒光法檢測17β-雌二醇的方法，具體步驟如下：

（1）建立已知17β-雌二醇濃度的檢測體系的步驟，取11支分別加入20 μL，1 μmol/L 17β-雌二醇功能核酸適配體的離心管，加入100 μL納米金溶液，充分混勻后將離心管置于25℃條件下孵育20 min，然后分別加入10μL不同濃度的17β-雌二醇溶液和丙磺酸緩沖液，使得整個檢測體系中17β-雌二醇溶液濃度維持在1000 nmol/L以下，充分混勻后再將離心管置于25℃條件下孵育20 min，在上述混合液中加入35 μL、2 mol/L的氯化鈉溶液和25 μL、200 μmol/L的羅丹明B溶液，充分混勻，使得檢測體系溶液總體積達到500 μL，留作以下測定用；

（2）另取1支離心管將17β-雌二醇溶液用10 μL超純水替代，按照上述步驟(1)的方法處理后作為空白對照體系溶液；

（3）分別取500 μL步驟(1)和步驟(2)制備的標準溶液和空白對照液，置于石英熒光比色皿中，所述的石英熒光比色皿的內徑為0.5 cm × 0.5 cm，外徑為1.0 cm × 1.0 cm，用熒光光度計進行掃描測定信號，掃描條件為：激發光狹縫為10 nm，發射光狹縫為2.5 nm，激發光波長為520 nm條件下掃描，獲得其熒光光譜信號，17β-雌二醇和空白對照液的熒光強度信號分別為F和F0，計算增強的熒光強度值F=F-F0；

（4）以不同濃度17β-雌二醇(CE2)與對應增強熒光強度值F作圖，繪制標準曲線；

（5）制備樣品檢測體系：取10μL待測樣品，加入到步驟(1)方法制備的檢測體系離心管中，充分混勻后再將離心管置于25℃條件下孵育20 min后，在混合液中加入30μL、2mol/L的氯化鈉溶液和25 μL、200 μmol/L的羅丹明B溶液，混勻至檢測體系總體積達到500μL，按步驟(3)方法測定熒光信號并計算?F。

（6）根據計算所得的F值，查標準曲線，可以求得樣品中17β-雌二醇含量。

（7）驗證：用本發明方法測定含17β-雌二醇濃度分別為300nmol/L、500nmol/L、和1000 nmol/L的水樣各一份，得到的平均回收率范圍為94.6%-100.6%，從而證明了本方法的可靠性。

（8）采用本方法測定水樣中17β-雌二醇的濃度范圍為0-1500nmol/L，線性擬合直線方程為y=0.983x+2.69，最低檢測限為0.51 nmol/L。

參考文獻

[1] [中國發明] CN201110187224.4 雌二醇及雌二醇苯甲酸酯的綠色還原制備方法

[2] [中國發明,中國發明授權] CN200880125151.2 通過質譜法檢測雌二醇的方法