手機掃碼訪問本站
微信咨詢
對羥基苯丙氨酸（tyrosine；Tyr）是人類成長過程中必不可少的氨基酸，如果體內缺乏酪氨酸則可能會導致出現智能下降，白化病等癥狀。當前國內外已普遍開始重視食品中酪氨酸含量的添加。因此，準確、靈敏的測定酪氨酸在營養學和臨床醫學上具有重要意義。由于DL-m-酪氨酸（間羥基苯丙氨酸）和L-酪氨酸（對羥基苯丙氨酸）分子式相同、結構相近，因此使得他們的一些物理和化學性質也相似，且兩者的外觀也極為相似，導致兩者難以區分。目前雖然已有很多報道關于定量分析酪氨酸濃度的方法，例如HPLC、電化學分析法、化學發光法、毛細管電泳法。但是，關于對DL-m-酪氨酸（間羥基苯丙氨酸）和L-酪氨酸（對羥基苯丙氨酸）兩種同分異構體的區分鑒別尚無報道。因此，迫切需要一種鑒定效果好且操作簡便快速、結果容易判斷的方法來鑒別這兩種物質。
對羥基苯丙氨酸是尿液檢測劑，用于檢測早期癌癥，主要就是檢測對羥基苯丙氨酸在尿液中的含量。腫瘤標志物中，對羥基苯丙氨酸及其代謝物在尿液中異常的腫瘤生命體中，所以被眾檢用來當做篩查標志物，準確度極高。
研究表明，對羥基苯丙氨酸的代謝紊亂不僅導致多種氨基酸代謝疾病的發生，而且與惡性腫瘤有一定的相關性。因此，研究人體體液中酪氨酸及其代謝產物的含量變化，對于多種疾病的輔助診斷、療效監測病因學等方面的研究意義重大。
現有文獻記載中，癌癥患者尿液中的對羥基苯丙氨酸濃度較正常人群會有明顯升高，對羥基苯丙氨酸作為一個新的腫瘤標志物逐漸開始被廣泛關注。目前，已報道的對羥基苯丙氨酸檢測方法多是檢測試劑與對羥基苯丙氨酸結合形成特定顏色，并與標準色卡對比，得出陽性或陰性的結論。這種方法只可進行簡單的定性而不可進行定量，且該方法干擾因素較多，易形成假陽性或假陰性。
1.儀器與藥品
高效液相色譜儀：島津NexeraXR，泵：LC-20ADXR，自動進樣器：SIL-20ACXR，柱溫箱：CTO-20A。質譜儀：ABSCIEXAPI4000，離心機：ThermoSORVALLST8R。
對羥基苯丙氨酸購自中檢所，同位素內標液L-對羥基苯丙氨酸-D2購自于TLC公司。
2.色譜檢測條件
色譜柱：ThermoC183um（2.1×100mm）色譜柱，流動相A相為0.1%（v/v）的甲酸，B相為乙腈，流速為0.2-0.3ml/min，柱溫40℃，進樣體積5ul。
3.儲備液的制備
對羥基苯丙氨酸儲備液的制備：稱量對羥基苯丙氨酸10mg，用電動移液器加入超純水使有效濃度為1mg/ml，標記為stock1。
L-對羥基苯丙氨酸-D2儲備液的制備：稱量L-對羥基苯丙氨酸-D210mg，用電動移液器加入超純水使有效濃度為1mg/ml，標記為stock2。
4.標準曲線溶液的制備
將儲備液stock1用超純水逐級稀釋到2000ng/ml，1000ng/ml，500ng/ml，100ng/ml，50ng/ml，10ng/ml，5ng/ml，1ng/ml，分別取上述各濃度溶液190ul，加入儲備液Stock210ul，混合均勻，得到對羥基苯丙氨酸的標準曲線溶液。
5.待測尿液樣本的制備
取人體尿液樣本1ml，1500×g/min離心10-15min，取上清液，稀釋50倍，過0.22um微孔濾膜，取190ul濾液加入10ul儲備液Stock2，混合均勻。
6.線性分析
取步驟4獲得的對羥基苯丙氨酸的標準曲線溶液進行液相質譜檢測，采用液相色譜-質譜儀連用進行檢測，對羥基苯丙氨酸的色譜檢測條件為步驟2所述條件。以標準曲線中校正濃度理論值為橫坐標，以對羥基苯丙氨酸與同位素內標的面積比值為縱坐標進行線性回歸分析。回歸曲線方程為y=4.31e+003x+1.53e+004（r=0.9991），權重系數為1/x2。
7.待測尿液樣本檢測
選取步驟5制備的尿液樣本200份進行液相質譜檢測，采用液相色譜-質譜儀連用進行檢測，檢測結果帶入步驟6的標準曲線方程，得到尿液樣本中對羥基苯丙氨酸含量。其中最大值為39407ng/ml；最小值為1260ng/ml；均值為11088ng/ml，陽性率為6%。
[1] 黃學梅, 吳立翔, 呂自蘭, 李影, & 郭變琴. . 尿液對羥基苯丙氨酸檢測在惡性腫瘤早期預測中的應用價值. 檢驗醫學與臨床(16), 40-42.
[2] 徐衛益, 許青, & 陳保德. (2016). 尿液對羥基苯丙氨酸水平在癌癥篩選中的應用研究. 國際檢驗醫學雜志(21), 2967-2969.
[3] 王新宇. . 對羥基苯丙氨酸（酪氨酸）尿液檢測在乳腺腫瘤診療中的應用. (Doctoral dissertation, 吉林大學).