633-03-4/堿性綠1的檢測方法

背景及概述^[1]

堿性綠1又叫燦爛綠，燦爛綠屬于堿性三苯甲烷類染料，在水產養殖中常用作殺菌劑和抗寄生蟲藥，由于三苯甲烷類具有致突變、致畸性和致癌作用，歐美和我國已嚴禁在水產養殖中使用三苯甲烷類染料，由于水產養殖過程中使用了燦爛綠而使池塘水體和土壤受到污染，在后續的養殖過程中容易在魚體內形成殘留，因此魚類養殖需對池塘水體和土壤進行有效的監控。

檢測方法^[1]

土壤中燦爛綠的檢測方法，包括以下步驟：

S1.制備標準儲備液

S1a.制備標準儲備液：氘代孔雀石綠標準儲備液：準確稱取氘代孔雀石綠標準品10.0mg于50mL燒杯中，用少量乙腈溶解并定容到50mL棕色容量瓶，混勻，濃度為200μg/mL。該溶液可在-18℃條件下保存6個月。

燦爛綠標準儲備液：準確稱取燦爛綠標準品10.0mg于50mL燒杯中，用少量乙腈溶解并定容到50mL棕色容量瓶，混勻，濃度為200μg/mL。該溶液可在-18℃條件下保存6個月。

S2.制備標準溶液

S2a.從燦爛綠標準儲備液中分別吸取0.5mL至100mL棕色容量瓶中，并用乙腈定容，混勻，濃度為1.0μg/mL，該溶液可在4℃條件下保存1個月；再吸取0.5mL至50mL棕色容量瓶中，并用乙腈定容，混勻，濃度為0.01μg/mL(該溶液臨用前配制)，得到燦爛綠標準溶液。

從氘代孔雀石綠標準儲備液中吸取0.5mL至100mL棕色容量瓶中，并用乙腈定容，混勻，得標準溶液,濃度為1.0μg/mL。該溶液可在冰箱中4℃保存1個月。得到氘代孔雀石綠標準溶液。

S3.制備標準溶液

S3a.制作標準曲線：分別用50％乙腈水稀釋氘代孔雀石綠標準溶液和燦爛綠標準溶液，將氘代孔雀石綠標準溶液加入燦爛綠標準溶液中，分別配置0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL及10.0ng/mL的標準工作液，各含氘代孔雀石綠5.0ng/mL。該溶液臨用現配。

S4.試樣制備

取土壤樣品2.0kg于通風處自然風干，去除較大的石塊和其它雜質，然后過2.0mm孔徑篩，用均質器或研磨器完全搗碎，混合均勻，作為實驗室檢測樣品。

S5.燦爛綠提取

準確稱取10g試樣(精確至0.01g)于80mL離心管內，加入1.0μg/mL氘代孔雀石綠標準溶液50μL，加入4mL0.1mol/L乙酸銨緩沖溶液、4mL1.0mol/L對甲苯磺酸溶液和50mL乙腈，用均質機以10000r/min的速度均質30s，4000r/min離心5min，上清液倒入裝有20mL水、40mL二氯甲烷的分液漏斗中，上下震蕩5min，靜置分層，吸掉上層水相，再加入20mL水重復上述操作，取下層溶液于雞心瓶中，40℃減壓濃縮至干，得樣品液。

樣品液加入10mL乙腈洗脫雞心瓶，取2mL過活化的中性氧化鋁柱(中性氧化鋁柱上端填1cm高無水硫酸鈉，使用前用5mL乙腈活化)，收集到150mL棕色雞心瓶中，20mL乙腈洗脫中性氧化鋁柱，洗脫液全部收集到同一雞心瓶中，40℃減壓旋轉蒸發至干，后用2mL乙腈+水(1+1)溶液渦旋洗脫，取清液用0.2μm有機濾膜過濾，得提取液。

S6.上機測試：取5μL提取液注入液質聯用儀檢測，具體測試條件如下：

液相色譜條件：

a、色譜柱：WATERS UPLC BEH C18 1.7μm,100*2.1mm或性能相當者

b、流動相：乙腈+5mmol/L乙酸銨(含0.1％甲酸)梯度洗脫

c、流速：0.3mL/min

d、進樣量：5μL

質譜條件：

a、離子源：電噴霧離子源

b、掃描方式：正離子掃描

c、檢測方式：多反應監測

d、電噴霧電壓：4000V

e、毛細管電壓：100V

f、輔助器壓力：35psi

g、反吹氣：11L/min

h燦爛綠離子對：358.3/297.2(定量)358.3/341.2

氘代孔雀石綠離子對：334.2/318.2

S7.結果判定：如果同濃度的提取液的色譜峰保留時間與同濃度的標準工作液的色譜峰保留時間一致。且試樣中目標化合物的兩個子離子的相對豐度與標準溶液的相對豐度一致，相對豐度偏差不超過允許的相對偏差，則可判斷樣品中存在燦爛綠。

S8.定量測量

分別用50％乙腈水稀釋氘代孔雀石綠標準溶液和燦爛綠標準溶液，將氘代孔雀石綠標準溶液加入燦爛綠標準溶液中，配置0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL的標準工作液，各含氘代孔雀石綠5.0ng/mL，以標準工作液進樣，以標準工作液的濃度為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標，繪制標準工作曲線，提取液等體積進樣測定，內標法定量；提取液中的燦爛綠含量應在標準曲線濃度范圍之內。

S9.加標回收

采用空白樣品進行加標，用1.0mL移液槍添加0.01μg/mL氘代孔雀石綠標準溶液500μL于空白樣品中，即相當于添加濃度為0.5μg/kg添加水平。

S10.空白試驗

除不稱取樣品外，重復步驟S5-S6步驟，得空白檢測液，檢測空白檢測液。

S11.結果計算

依據以下公式計算試樣中燦爛綠的殘留量：

式中：X為土壤中燦爛綠的含量，μg/kg；c為從標準曲線上讀出的提取液中目標物燦爛綠的含量，ng/mL；V為提取液的體積，mL；m為土壤的稱樣量，g；n為稀釋倍數。

應用^[2]

CN201710400093.0提供了一種可褪色黑墨水及其制備方法，墨水組分按重量百分比計：紅色染料0.8-0.85％，綠色染料2.5-3.0％，增稠劑3.0-3.5％，表面活性劑1.0-1.5％，防腐劑0.15-0.20％，蒸餾水余量，所述的紅色染料為酸性品紅或堿性品紅；所述的綠色染料為酸性綠、堿性綠或燦爛綠。該墨水制備方法簡單，原料來源廣泛，成本較低。該墨水無毒，無刺激性氣味，且遇還原性物質可褪色，書寫過的紙張可以回收再利用。

參考文獻

[1] [中國發明] CN201910909255.2 土壤中燦爛綠的檢測方法

[2] CN201710400093.0一種可褪色黑墨水及其制備方