70578-24-4 / 滇烏頭堿的應用

背景及概述^[1][2]

黃草烏（Aconitum vilmorinianum Kom） 為毛茛科烏頭屬植物，主要分布于滇中及滇西部，是云南特色藥用植物，具有祛風除濕、消腫止痛的功效，常用于冬季進補或治療各種風濕性疾病及疑難雜癥，但因安全范圍較窄，使用不當或被非法使用導致中毒或死亡的案例日益增多。

滇烏頭堿（Yunaconitine） 為黃草烏中含量較高的一種雙酯二萜生物堿，又叫異烏頭堿、黃草烏堿乙，為二萜生物堿，分子式C₃₅H₄₉O₁₁，分子量659.77， 熔點142℃?143℃，可溶于甲醇、乙醇溶液，易溶于丙酮、氯仿、二氯甲烷和酸水，不溶于石油醚和水。滇烏頭堿具有抗炎、鎮痛和局部麻醉作用。但其毒性較大，常進行分子結構修飾，降低毒性，做為粗莖烏頭堿合成原料。現有提取滇烏頭堿的方法，一般采用酸水滲漉或有機試劑提取，再萃取和柱層析。這樣有機試劑和酸水用量較大，因為一般植物中滇烏頭堿含量較低，在1‰左右，同時現有烏頭類藥 材中都有多種毒性生物堿，容易造成人員中毒。采用超臨界CO₂萃取是比較理想方法，即可避免烏頭生物堿在提取中減少，有是一種無污染提取方法。如“亞東烏頭總生物堿的超臨界CO₂萃取及含量測定”，該方法取得了很好的收率和效果，工藝專屬性差。

藥代動力學^[2]

采用1.1 mg/kg 滇烏頭堿劑量灌胃給藥大鼠，建立滇烏頭堿的大鼠中毒模型，并于給藥后2h 處死大鼠，迅速提取心血及11 種臟器組織，采用UPLC-MS/MS 法檢測中毒大鼠生物檢材中滇烏頭堿的含量，統計學分析發現：灌胃滇烏頭堿2 h 后，滇烏頭堿在大鼠體內分布廣泛，以胃、小腸和肝臟組織中的含量較高，即消化道分布較高，提示滇烏頭堿的組織分布可能與外排轉運蛋白有關，滇烏頭堿可能影響P- 糖蛋白等轉運體的表達水平，從而影響滇烏頭堿的藥代動力學特征，組織分布、藥效和毒性，但具體機制有待于進一步研究.

應用^[3-5]

1）抗炎和鎮痛作用：滇烏頭堿對毛細血管通透性、不同致炎劑產生的足跖腫脹、白細胞游走和棉球肉芽組織增生均有明顯抑制作用。摘除雙側腎上腺后滇烏頭堿抗炎作用仍存在，但不延長生存時間。測痛方法證實滇烏頭堿有鎮痛作用。對酵母致熱大鼠有明顯解熱作用。

2）免疫調節作用。從云南產的烏頭屬植物根莖中分得的滇烏頭堿(YAc)毒性極高，生理活性亦強。YAc ip 50μg/kg能顯著延長小鼠耳后移植心肌的存活時間，與潑尼龍作用相近，并對實驗性自身免疫性腦脊髓炎大鼠的遲發型超敏反應有抑制傾向。YAc對抗體形成無明確的抑制作用，但能提高血清總補體的活性及網狀內皮系統的吞噬功能，有助于炎癥反應中病原物質的清除。

3）殺菌、抗菌作用。滇烏頭堿作為殺菌、抗菌劑，能有效抑制多種植物病原菌。最佳應用在抗植物霜霉病（Plasmoparaviticola），抗植物網斑病菌（Pyrenophorateres），抗植物小麥葉斑病（Septoria tritici），抗植物禾頂囊殼（Gaeumannomycesgraminis）和抗植物黃色鐮刀菌（Fusarium culmorum）方面。滇烏頭堿在應用時，首先采用DMSO溶解制備成母液。其應用驗證試驗如下：取溫室中植物葡萄的葉片和葉段，放置在有水瓊脂培養的多孔板中（24孔板），葉片或葉段預先噴灑不同濃度的測試溶液。噴灑后接種病原菌霜霉病，培養9天后，根據葉片未感染病原菌面積計算抑制率。濃度為20PPM或60PPM的滇烏頭堿對霜霉病的抑制率為20%，濃度為200PPM的滇烏頭堿抑制率為50%。

制備^[1]

一種滇烏頭堿的純化方法，其特征在于包括以下步驟：以黃草烏藥材為原料，粉碎，加入醇浸潤1?2小時，加入萃取釜中，采用超臨界CO₂萃取，收集滇烏頭堿萃取物，用酸水溶解，過濾，加入陽離子交換樹脂吸附，堿性醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮，加二氯甲烷萃取，萃取液濃縮，加氧化鋁干燥后裝柱，用石油醚?二氯甲烷混合溶液洗脫，薄層檢測，收集滇烏頭堿流分，洗脫液濃縮小體積放置結晶，結晶物干燥即得滇烏頭堿產品。

含量測定^[6]

同時測定制黃草烏中滇烏頭堿和8-去乙酰基滇烏頭堿的方法，包括對照品溶液制備、供試品溶液制備、檢測步驟，具體包括：

A、對照品溶液制備：分別精密稱取滇烏頭堿和8-去乙酰基滇烏頭堿，加0.1%的鹽酸甲醇配制成滇烏頭堿濃度16.11mg/mL、8-去乙酰基滇烏頭堿濃度為30.13mg/mL的混合溶液，得到對照品溶液；

B、供試品溶液制備：取制黃草烏粉末2.00g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨水2mL潤濕，加乙醚20mL，超聲處理提取，循環提取2~4次，合并提取液，蒸干，殘渣加0.1% 的鹽酸甲醇溶解并定容到10mL容量瓶中，搖勻，濾過，取續濾液，0.45μm微孔濾膜濾過，得到供試品溶液；

C、檢測：將對照品溶液和供試品溶液注入高效液相色譜儀進行檢測。

主要參考資料

[1] CN201010603865.9一種滇烏頭堿的純化方法

[2] UPLC- MS/MS 法研究滇烏頭堿在大鼠體內組織的分布

[3] 滇烏頭堿的抗炎和鎮痛作用

[4] 滇烏頭堿的免疫調節作用

[5] CN201210471272.0滇烏頭堿在農藥方面的應用

[6] CN201510101815.3一種同時測定制黃草烏中滇烏頭堿和8-去乙酰基滇烏頭堿的方法