80863-62-3 / 阿力甜的測(cè)定

背景及概述^[1]

阿力甜是一種以天冬氨酸和丙氨酸為原料合成的二肽類人工合成甜味劑，其甜度為蔗糖的2000倍以上，比阿斯巴甜高10倍，具有口感好、甜度高和熱量低的優(yōu)點(diǎn)，是蔗糖的替代品之一，性質(zhì)穩(wěn)定，廣泛應(yīng)用于食品行業(yè)，可添加于乳制品，冷凍飲品，蜜餞，飲料，膠基糖果，果凍等食品中GB 2760-2014《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中對(duì)以上食品的最大使用限量均做出明確的規(guī)定。

阿力甜作為強(qiáng)甜味劑，一般被認(rèn)為是無(wú)毒和刺激性的物質(zhì)，WHO 規(guī)定阿力糖日允許攝入量可達(dá) 0.1 mg/kg。目前，阿力甜尚未被 FDA 認(rèn)可，全世界只有中國(guó)、澳大利亞和墨西哥等6個(gè)國(guó)家批準(zhǔn)使用，我國(guó)衛(wèi)生部于1994年就已批準(zhǔn)使用。1996年JECFA 確定的 ADI 值為 1mg/kg。

含量測(cè)定^[1]

1 儀器與試劑

1.1 儀器

高效液相色譜儀（檢測(cè)器；DAD，型號(hào)：1260 廠家：美國(guó) Agilent），電子天平（精確度：0.01mg 型號(hào)：BT125D，廠家：賽多利斯儀器有限公司），超聲波清洗器（型號(hào)：S180H，廠家：德國(guó) ELMA）。漩渦混合器（型號(hào)：TYXH-II，廠家：TYXH-II），組織搗碎機(jī)（型號(hào)：JJ-2B，廠家：金壇市城東新瑞儀器廠）。

1.2 試劑

阿力甜標(biāo)準(zhǔn)品（來(lái)源：stanford Chemicals，批號(hào)：A161115-09；純度：98.09%），甲醇（色譜級(jí)，美國(guó)FISHER），實(shí)驗(yàn)用水均為 GB/T 6682-2008 規(guī)定的一級(jí)水。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

（1）標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備：精密稱取 2.41 mg 阿力甜標(biāo)準(zhǔn)品，加水溶解并稀釋至 5.00 mL。濃度：0.472 8 mg/mL。

（2）標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的制備：取上述溶液各0.1 mL，0.2 mL，0.3 mL，0.5 mL，1.0 mL分別置于10 mL量瓶，用水稀釋至刻度，搖勻，即為標(biāo)準(zhǔn)使用液。

2.2 樣品前處理與測(cè)定

蜜餞首先需要去掉果核。用食品加工機(jī)按試樣與水的質(zhì)量比為 1∶4 進(jìn)行勻漿，稱取約 5 g（精確到0.001 g）勻漿試樣于25 mL 的離心管中，加入 10 mL 70%的甲醇水溶液，搖勻，超聲 10 min，4 000 r/min離心5 min，上清液轉(zhuǎn)入25 mL容量瓶，再加8 mL 50%的甲醇水溶液重復(fù)操作一次，上清液轉(zhuǎn)同一個(gè) 25 mL 容量瓶，最后用 50%的甲醇水溶液定容，經(jīng)0.45 μm有機(jī)系濾膜過(guò)濾后用于色譜分析。

3 色譜條件

色譜柱：Waters SunFire C18 250 mm×6.4 mm，5 μm，檢測(cè)波長(zhǎng)：200 nm 柱溫：40 ℃，流速：1 mL/min，進(jìn)樣量：10 μL，流動(dòng)相：V甲醇∶V水＝（40∶60）。

4 數(shù)學(xué)模型的建立

試樣中阿斯巴甜或阿力甜含量的計(jì)算：

式中：X——試樣中阿斯巴甜或阿力甜的含量，g/kg；

ρ——由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出進(jìn)樣液中阿斯巴甜或阿力甜的濃度，μg/mL；

V——試樣的最后定容體積，mL；

m——試樣質(zhì)量，g；

1 000——由μg/g換算成g/kg的換算因子。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備^[2]

一種阿力甜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備方法，包括以下各步驟：

(1)阿力甜溶液的制備：制備阿力甜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的原料為工業(yè)級(jí)阿力甜，將阿力甜原 料溶于水并采用超聲溶解，然后經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾，得阿力甜溶液；

(2)液相色譜制備：將阿力甜溶液注入制備色譜分離純餾分，其色譜條件為色譜柱 為PREP-ODS(H)·KIT(250mm×20mm,5μm)；流動(dòng)相：40％(v/v)甲醇水溶液；流速：10mL/min； 柱溫：30℃；運(yùn)行時(shí)間：15min；檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm，進(jìn)樣量0.2mL，收集7.5-9min之內(nèi)的餾分；

(3)餾分收集：餾分接收于預(yù)先氮?dú)馓畛涞耐獗诎a箔紙的棕色瓶中,然后加入 少量鹽酸中和至pH7；

(4)干燥：餾分置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀采用減壓蒸餾的方法于55℃-75℃下，然后置于凍 干機(jī)-50℃中凍干24小時(shí)，凍干后的阿力甜固體碾磨粉碎后，再次凍干24小時(shí)已盡量去除游 離水，得阿力甜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；經(jīng)測(cè)定，該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度為99.4％。

(5)保存：在相對(duì)獨(dú)立和潔凈手套箱內(nèi)對(duì)制備的純阿力甜固體采用2mL棕色樣品瓶 進(jìn)行分裝，用帶有聚四氟乙烯內(nèi)襯的黑色瓶蓋加封，并采用塑料袋獨(dú)立真空塑封。

主要參考資料

[1]包秘,唐昭領(lǐng).高效液相色譜法測(cè)定蜜餞中阿力甜含量的不確定度分析[J].食品與發(fā)酵科技,2019,55(06):109-114.

[2] [中國(guó)發(fā)明,中國(guó)發(fā)明授權(quán)] CN201610174004.0 一種阿力甜標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備方法