87205-99-0 / 二氫丹參酮I的應用

背景及概述^[1]

丹參，為唇形科植物丹參(SalviamiltiorrhizaBunge)的干燥根及根莖，最早記載于《神農本草經》。丹參味苦、性微寒，有活血祛瘀、安神寧心之傳統功效。植物化學研究顯示，丹參的化學成分主要包括脂溶性和水溶性兩部分。丹參酮類是丹參中的主要脂溶性成分，是具有橙黃色或橙紅色特征的松香烷型二萜類化合物。藥理研究證明，丹參酮類化合物具有抗氧化、抗菌及抗腫瘤方面的作用。二氫丹參酮I(DihydrotanshinoneI，簡稱DHT)是丹參酮大家族的一員，其分子式為C18H14O3，分子量為278.3。研究顯示，DHT具有抗腫瘤、心血管保護的藥理活性。

應用^[1-3]

二氫丹參酮I是丹參根莖的提取物，丹參是臨床中最常用的活血化瘀的中藥，相關文獻報道丹參具有增加冠脈血流量、擴張冠狀動脈、防止心肌缺血等心血管作用，以及用于治療胃癌癌、肝癌、宮頸癌等多種疾病。實驗顯示二氫丹參酮I(DHT)能有效改善實驗性潰瘍性結腸炎小鼠的包括體重下降、腹瀉、血便和精神狀態等多方面的一般狀態，明顯改善病理變化、顯著減輕炎癥反應、降低血漿炎癥因子的水平等，顯示出DHT具有明顯的抗潰瘍性結腸炎作用。二氫丹參酮I治療潰瘍性結腸炎的優點在于作用迅速、療效確切且藥效良好。此外，二氫丹參酮I為丹參中提取的天然成分，在實驗過程中未見明顯副作用及毒性反應，揭示了二氫丹參酮I是一種安全有效的抗潰瘍性結腸炎的藥物。

此外，氫丹參酮I是丹參中最主要的抗腫瘤成分，并且二氫丹參酮I對人體正常細胞毒性較小，游研究主要是檢測二氫丹參酮I對卵巢癌的抑制作用機制，證明二氫丹參酮I抑制卵巢癌的增殖及轉移，為臨床治療卵巢癌提供了新的策略。采用MTT法檢測體外培養的A2780和OV2008細胞的生長與增殖情況；采用劃痕和侵襲實驗檢測二氫丹參酮I對A2780和OV2008細胞轉移能力的影響；采用基因芯片技術檢測A2780細胞經過二氫丹參酮I處理后的基因變化情況；根據目的基因PIK3CA的堿基序列，設計特異的過表達質粒及無關(NC)序列，通過lipofectamin2000脂質體法瞬時轉染A2780細胞，獲得PIK3CA表達上調的細胞模型，Westernblot方法檢蛋白表達情況；qPCR和Westernblot方法檢測細胞中目的基因的mRNA及蛋白質水平的表達情況；采用MTT法和克隆形成實驗比較二氫丹參酮I對A2780細胞與上調PIK3CA的A2780細胞生長和增殖得變化情況；采用劃痕和侵襲實驗比較二氫丹參酮I對A2780細胞與上調PIK3CA的A2780細胞的轉移能力。結果顯示：1）MTT驗證了二氫丹參酮I對A2780和OV2008細胞的增殖抑制作用，其抑制作用具有時間和劑量依賴關系。2）劃痕與侵襲實驗證明二氫丹參酮I對A2780與OV2008的轉移具有抑制作用。3）基因芯片結果顯示經二氫丹參酮I處理后A2780細胞中PIK3CA、DDB2、HGF等增殖與轉移相關基因下調。4）利用脂質體瞬時轉染技術，成功獲得PIK3CA表達上調的細胞模型，PIK3CA表達上調組細胞受二氫丹參酮I后的生長和增殖抑制作用明顯低于對照組細胞。5）PIK3CA表達上調組細胞受二氫丹參酮I后的轉移抑制作用明顯低于對照組細胞。因此研究結果表明二氫丹參酮I通過下調PIK3CA的表達影響PI3K/AKT信號通路抑制卵巢癌細胞的增殖與轉移。二氫丹參酮I治療癌癥具有潛在的臨床意義。

另外，二氫丹參酮Ⅰ(DHT)具有預防實驗性動脈粥樣硬化(AS)的作用。研究采用灌胃給藥，每日1次，總計連續給藥12周。正常組及模型組給予等量的1%吐溫-80作為對照。12周后，測定空腹血糖(FBG)、體重和腹圍。測定血清總膽固醇(totalcholesterol，TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的含量。取主動脈，進行油紅O染色和HE染色。免疫組化檢測動脈壁凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受-1(LOX-1)、NADPH氧化酶4(NOX4)及核轉錄因子-kappaBp65(，NF-κBp65)的表達；免疫熒光檢測動脈壁LOX-1的表達。結果顯示兩個劑量DHT對AS模型的FBG、體重和腹圍均無明顯影響。與模型組相比，DHT高劑量顯著降低血清TC、TG、LDL-C水平，明顯增加血清中SOD和GSH含量，明顯降低MDA含量。油紅O和HE染色結果表明，對照組主動脈管腔內壁光滑，未見異常；模型組動脈內膜增厚，呈現橙紅色脂質浸潤和泡沫細胞壞死形成的空泡；DHT組脂質浸潤明顯減少，空泡面積縮小甚至消失。免疫組化和免疫熒光結果顯示DHT可顯著降低動脈壁NOX4、NF-κBp65和LOX-1的表達。結論：DHT對實驗性AS具有一定的預防作用，其機制與降低血清中脂質水平和ROS水平有關，同時抑制NOX4、NF-κBp65和LOX-1在斑塊區域中的表達。

制備^[4]

一種采用中、高壓制備液相法制備丹參酮IIA和二氫丹參酮I的方法，包括以下步驟：

步驟A：提取：將丹參藥渣粉碎后過篩得到丹參藥渣粉末，加入乙醇溶液，進行回流提取2～3次，每次1～2小時，合并提取液并濃縮得到丹參醇提物浸膏；

步驟B：萃取除雜：取步驟A制備得到的丹參醇提物浸膏，加純水溶解，分別用石油醚和乙酸乙酯依次萃取，反復萃取三次，合并乙酸乙酯部位提取液，減壓濃縮，得乙酸乙酯部位濃縮液；

步驟C：中壓制備液相純化：稱取步驟B制備得到的乙酸乙酯部位濃縮液加入硅膠攪拌均勻，然后裝入中壓進樣器中，選擇石油醚和乙酸乙酯為流動相，設置流動相流速為15～20mL/min，進行中壓制備液相純化；

步驟D：采用UPLC分析步驟C的中壓制備液相洗脫物，然后合并丹參酮IIA和二氫丹參酮I部位：

步驟E：高壓制備液相純化：取步驟D合并的丹參酮IIA和二氫丹參酮I部位，濃縮，加入甲醇溶解，用0.22μm濾膜過濾后進高壓制備液相純化，選擇甲醇和超純水為流動相，梯度洗脫，經高壓制備液相純化得丹參酮IIA和二氫丹參酮I。

主要參考資料

[1] CN201710711874.1二氫丹參酮Ⅰ在制備治療潰瘍性結腸炎藥物中的應用

[2] 二氫丹參酮Ⅰ抑制卵巢癌增殖與轉移作用的機制研究

[3] 二氫丹參酮Ⅰ預防實驗性動脈粥樣硬化作用的初步研究

[4] CN201710026412.6采用中、高壓制備液相法制備丹參酮IIA和二氫丹參酮I的方法