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堿性磷酸酶（英語：Alkaline phosphatase，簡(jiǎn)稱ALP或ALKP） (EC3.1.3.1)是一類水解酶，可在核苷酸、蛋白質(zhì)、生物堿等分子上去除磷酸基，進(jìn)行去磷酸化作用，在堿性環(huán)境下最為有效，故得名堿性磷酸酶。
在革蘭氏陰性菌中，堿性磷酸酶位于細(xì)胞膜以外的周質(zhì)空間。因?yàn)橹苜|(zhì)空間相比細(xì)胞內(nèi)部受環(huán)境變化的影響更大，故細(xì)菌堿性磷酸酶更不易失活、變性和降解，能保持較高活性。至于堿性磷酸酶為何分布于此目前還未完全清楚，一個(gè)簡(jiǎn)單的說法是堿性磷酸酶在此切割出游離的磷酸以供吸收。支持這一觀點(diǎn)的證據(jù)是堿性磷酸酶通常在細(xì)菌面臨磷酸不足時(shí)合成。然而，也有其他的可能性存在，比如磷酸基團(tuán)的存在通常會(huì)阻礙生物大分子透過細(xì)胞膜，而去磷酸化作用可能有助于細(xì)菌對(duì)環(huán)境中物質(zhì)的吸收。
大腸桿菌堿性磷酸酶的最適pH為8.0，而家牛的最適pH偏高一點(diǎn)，達(dá)8.5。
在人體中，堿性磷酸酶幾乎存在于全身所有的組織，特別集中于肝臟、膽管、腎、骨骼和胎盤。
在人類和其它哺乳動(dòng)物基因組中包含以下三種堿性磷酸酶的同工酶：
ALPI—— 腸道（分子量為150 MDa）
ALPL—— 不具有組織特異性（肝、骨骼、腎）
ALPP—— 胎盤
正常情況下成年人體內(nèi)的ALP水平為20到140IU/L，兒童和孕婦的水平會(huì)更高一些。
水平升高
水平降低
表示有hypophosphatasia的可能
白細(xì)胞
在科研中的應(yīng)用
堿性磷酸酶在實(shí)驗(yàn)室中最常見的應(yīng)用就是除去DNA 5'端的磷酸基，防止載體發(fā)生自連環(huán)化。