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胰蛋白酶是一種酶。 胰蛋白酶在小腸工作，它會將蛋白質水解為肽，進而分解為氨基酸。這是蛋白質能被人體吸收的必要過程。這種酶的作用原理和其他絲氨酸蛋白酶差不多。 胰蛋白酶的最佳pH值約為8，溫度約為37℃。
胰蛋白酶是從牛、豬、羊的胰臟提取，純化獲得的結晶，再制成的凍干制劑。易溶于水，不溶于三氯甲烷、乙醇、乙醚等有機溶劑。在pH1.8時，短時間煮沸幾乎不失活；在堿溶液中加熱則變性沉淀，Ca2+有保護和激活作用，胰蛋白酶的等電點為pH10.1。
牛胰蛋白酶原有229個氨基酸組成，含6對二硫鍵，其氨基酸排列順序和晶體結構已被闡明。在腸激酶活自身催化下，酶原的N末端賴氨酸與異亮氨酸殘基之間的肽鍵被水解，釋放出來纈-天-天-天-天-賴6肽，生成有活性的胰蛋白酶。牛的胰蛋白酶氨基酸殘基223個，分子量23800[2]，活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶。
豬胰蛋白酶的化學結構與牛胰蛋白酶十分相似，在氨基酸殘基排列順序中，只有41個氨基酸殘基不同，但分子構型有很大區別。沉降系數S20W為2.77S，pI=10.8，熱穩定性較牛胰蛋白酶穩定，Ca2+對酶的保護作用不及牛羊的明顯，無螯合Ca2+的中心部位。有6對二硫鍵，斷裂1~2個鍵，均不至于破壞酶分子的完整結構而保護了酶的活性。酶的活力分別相當于牛的72%及羊的61%。
羊胰蛋白酶與牛、豬的相似，但其活力略高于牛和豬的。
胰蛋白酶專一作用有堿性氨基酸精氨酸及賴氨酸羧基所組成的肽鍵。酶本身很容易自溶，由原先的β-胰蛋白酶酶轉化為α-胰蛋白酶，再進一步降解為擬胰蛋白酶，乃至碎片，活力也逐步下降而喪失。
除存在于脊椎動物外，還存在于蠶、海盤車、蝲姑、放線菌等范圍廣泛的生物體中。另外與高等動物的血液凝固和炎癥等有關的凝血酶、纖溶酶、舒血管素等蛋白酶在化學結構和特異性等方面與胰蛋白酶具有密切的關系，可以認為這些酶是從共同的祖先酶在進化過程中分化而來的。胰糜蛋白酶與彈性蛋白酶在結構和催化機制方面也具有密切關系，但其特異性則完全不同。
胰蛋白酶系自牛、羊或豬胰中提取的一種蛋白水解酶。中國藥品標準規定按干燥品計算，每1mg 的效價不得少于2500單位。 由牛、羊、豬胰臟提取而得的一種肽鏈內切酶，只斷裂賴氨酸或精氨酸的羧基參與形成的肽鍵。
胰蛋白酶選擇地水解蛋白質中所有的由賴氨酸Lys或精氨酸Arg的羧基所構成的肽鍵。 如果脯氨酸Pro殘基位于切割位點的羧基側，則不發生切割。
胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質水解從而使細胞離散。不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應不一樣。胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關，在 pH 為 8.0 、溫度為 37℃ 時，胰酶溶液的作用能力最強。使用胰酶時，應把握好濃度、溫度和時間，以免消化過度造成細胞損傷。因 Ca2+ 、 Mg2+ 和血清、蛋白質可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時應選用不含 Ca2+ 、 Mg2+ 的 BSS ，如： D-Hanks 液。終止消化時，可用含有血清培養液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細胞的作用。
1. 稱取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液濃度為 0.25 %，用電子天平準確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水（若用雙蒸水需要調 PH 到 7.2 左右）或 PBS （ D-hanks ）液中。攪拌混勻，置于 4℃ 內過夜。
2. 用注射濾器抽濾消毒：配好的胰酶溶液要在超凈臺內用注射濾器（ 0.22 微米微孔濾膜）抽濾除菌。
3. 分裝成小瓶于 -20℃ 保存以備使用