9045-22-1 / 肝素鋰制備方法

背景技術

肝素，在臨床血液檢驗中以鈉鹽和鋰鹽為常見，具有獨特的應用價值，肝素螯合力低，對水分子運動的影響小，對血液成分干擾少，不影響紅細胞體積，不引起溶血，所以在多種以全血或血漿為標本的檢驗中，推薦使用肝素作為抗凝劑。適用于紅細胞脆性試驗、血氣分析、紅細胞壓積實驗、血流變及急診生化測定。在對Ph值、血氣、電解質和鈣離子的檢測中，肝素是唯一可以使用的抗凝劑，而肝素鋰在檢測非鋰離子時產生干擾的可能性最小，所以推薦使用肝素鋰作為抗凝劑，目前在血液檢驗中，肝素鋰正在逐步取代肝素鈉。

肝素鋰的制備，目前國內專利200510019846. 0公開了離子平衡交換法制備肝素鋰，該法部分工藝環節需要低溫條件（10℃以下）操作，對物料及環境溫度控制要求較高， 硬件設施投入較大；該法在去蛋白工藝環節采用強酸性條件操作（PH1.5)，對肝素活性損失較大（肝素溶液在低PH值環境下很不穩定，極易降解失活），影響最終活性收率和效價， 可操作性不強；該法采用超濾濃縮分離技術，超濾設備昂貴，硬件投入較大；該法采用的離子平衡交換方式，是以高濃度鋰離子不斷介入的方式來實現肝素鈉向肝素鋰的轉換，無法保證動態離子平衡轉換的充分性和連續穩定性。國外制備肝素鋰均采用離子交換法，該法需要選用精品肝素鈉為原料，原料成本高，而且在離子交換過程中可引起PH急劇下降，嚴重影響產品的收率和效價，并且交換過程需要在低溫提條件下進行，導致肝素鋰生產硬件設施投入較大，生產成本較高。

發明內容

本發明的目的在于提供一種肝素鋰制備方法，以解決上述問題。

本發明的技術方案為：肝素鋰制備方法，它是以下列步驟制備：

1、粗品肝素酶解：將粗品肝素鈉溶解，調PH值為7. 5-9. 0，升溫至50-55°C，加入肝素酶解胰酶，保溫4-5小時，調PH值9. 0-11，升溫至85°C?90°C后，冷卻，過濾去除沉淀物， 濾液用乙醇沉淀，收集沉淀物（A)；

2、去蛋白：步驟1所得沉淀物（A)用水溶解，攪拌，調PH至9-11，加入蛋白質絮凝沉淀劑，攪拌，靜置，過濾去除沉淀，收集濾液（D)，濾液（D)調PH至11-13值，攪拌，靜置，過濾去除沉淀，收集濾液（E)，濾液（E)調PH值至中性，用乙醇沉淀，收集沉淀物（B)；

3、氧化脫色：將步驟2所得沉淀物（B)用水溶解，用過氧化氫氧化24-48小時，調整PH至10. 5-11. 5后，過濾去除沉淀物，收集濾液（F)，濾液（F)調PH值至6. 5-7. 5，用乙醇沉淀，收集沉淀物（C)；

4、樹脂交換：將步驟3所得沉淀物（C)用水溶解，加入LiCl，攪拌溶解，通過樹脂柱進行離子交換，收集過柱流出液，得肝素鋰溶液；

5、沉淀、脫水、干燥：將步驟4所得肝素鋰溶液，過濾，用乙醇沉淀，收集沉淀物(G)，沉淀物（G)脫水，然后真空干燥，粉碎，得肝素鋰精品。

步驟1中，所述肝素酶解胰酶選用胰蛋白酶、含胰蛋白酶的復合胰酶、中性胰蛋白酶、堿性蛋白酶中的一種或含兩種以上的組合。

步驟2中，所述蛋白質絮凝沉淀劑選用聚丙烯酸鈉、聚合氯化鋁、聚丙烯酸鈣、聚合氯化鋁、氯化鈣中的一種或含兩種以上的組合。

所述步驟5中，所述沉淀物（G)脫水是用無水乙醇實施脫水。

所述步驟1中，所述粗品肝素鈉溶解是：用NaCL溶液將粗品肝素鈉原料溶解，粗品肝素鈉溶液質量濃度為8%-16%。

所述步驟1中，在粗品肝素鈉溶液中加入肝素酶解酶的質量百分比是粗品肝素鈉溶液質量的0. 1-0.3%。

所述步驟4中，沉淀物（C)的水溶液的質量百分比濃度是8 % -20 % ;在沉淀物（C) 的水溶液中加入的氯化鋰的質量百分比是沉淀物（C)水溶液質量的I. 5% -8. 5% ;所用樹脂為離子型交換樹脂。

所述粗品肝素鈉是市售商品原料,效價為65-105IU/mg不等。

本發明，以粗品肝素鈉為原料，原料來源廣泛，成本較低。此外，本發明，硬件設施投入小，環境溫度要求不高，可實現工藝全程的常溫條件下操作（除局部需要短時間加熱的環節外），樹脂法動態離子交換過程溫和，不會有活性損失，回收率達到95%以上，產品效價達到160IU/mg以上。

具體實施方式

步驟1:用1% -3%的NaCL溶液將粗品肝素鈉原料（市售商品原料，效價 65-105IU/mg不等）攪拌溶解，粗品肝素鈉濃度為8%-16% (質量百分比濃度），用5M的 NaOH溶液調PH至7. 5-9. 0，升溫至50-55°C，按粗品肝素鈉溶液質量的0. 1-0. 3%加入肝素酶解胰蛋白酶，保溫4-5小時，用5M的NaOH溶液調PH值至9. 0-11，升溫至85°C?90°C，冷卻到常溫，過濾去除沉淀物，濾液用0. 8-1. 5倍體積95%的乙醇沉淀4小時以上，收集沉淀物A ;

步驟2 :將沉淀物A用純水攪拌溶解，溶解濃度為10% -20% (質量百分比)，用 5M的NaOH溶液調PH至8. 5-11，按沉淀物A水溶液質量的0. 1% -5%加入蛋白質絮凝沉淀劑氯化鈣，攪拌1-2小時，靜置1小時以上，過濾去除沉淀，收集濾液，用5M的NaOH(或碳酸鈉）溶液調PH值至11-13，攪拌均勻，靜置30分鐘以上，過濾去除沉淀，收集濾液，用6M的 HCL溶液調PH值至中性，用0. 8-1. 5倍體積的95%乙醇沉淀4小時以上，收集沉淀物B ；

步驟3 :將沉淀物B用純水溶解，溶解濃度為15% -30% (質量百分比濃度)，按沉淀物B水溶液質量的1%?4%加入純度為30%的過氧化氫（可以分次加入），氧化24-48 小時，用5M的NaOH溶液調整PH至10. 5-11. 5，過濾去除沉淀物，收集濾液，用6M的HCL溶液調PH值至6. 5-7. 5，用0. 8-1. 5倍體積的95%乙醇沉淀4小時以上，收集沉淀物C ；

步驟4 :將所得沉淀物C用純水溶解，溶解度為8% -20% (質量百分比濃度)，再按沉淀物C溶液質量的1. 5% -8. 5%加入氯化鋰，攪拌溶解，通過已再生轉型好的離子型樹脂柱進行離子交換，交換流速10BV/h以下，收集過柱流出液，并用1-2倍量的純水通柱，合并流出液，得肝素鋰鹽溶液；

步驟5 :將所得肝素鋰鹽溶液，過濾，用0. 8-3倍體積的95%乙醇沉淀4小時以上， 收集沉淀物，用無水乙醇脫水兩次，然后真空干燥，粉碎，得肝素鋰精品。