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9045-22-1 / 肝素鋰制備及應用

背景及概述[1][2]

肝素實際上就是一種含有硫酸基團的粘多糖,發現于肝臟,具有強負電荷、強酸性的特點,主要從豬小腸黏膜或者牛肺中提取。肝素可加快凝血酶失活,提高其親和力,對血小板的聚集有抑制作用,能增強蛋白C活性,對血管新生的調控作用較強,同時還能起著抗過敏、抗炎的作用。臨床上較為常見的肝素鹽包括肝素鈉、肝素鋰,其中由于肝素鈉的成本低不利于鈉離子檢測,應用價值低于肝素鋰。

研究表明,肝素鋰抗凝血漿與血清中TP、ASO、UA、ALT、Mg、Cl、TC、CRP 檢測結果比較差異無統計學意義(P>0.05)。肝素鋰抗凝血漿與血清中HBD、LDH、TBA 檢測結果比較差異有統計學意義(P<0.05)。因此除HBD、LDH、TBA 外,肝素鋰抗凝血漿與血清之間的相關性較好。因此,在生活檢測中采用肝素鋰抗凝血漿代替血清的可行性較高,可將其作為一種重要的檢測方法。

應用[2][3][4]

肝素,在臨床血液檢驗中以鈉鹽和鋰鹽為常見,具有獨特的應用價值,肝素螯合力低,對水分子運動的影響小,對血液成分干擾少,不影響紅細胞體積,不引起溶血,所以在多種以全血或血漿為標本的檢驗中,推薦使用肝素作為抗凝劑。適用于紅細胞脆性試驗、血氣分析、紅細胞壓積實驗、血流變及急診生化測定。 在對ph值、血氣、電解質和鈣離子的檢測中,肝素是唯一可以使用的抗凝劑,而肝素鋰在檢測非鋰離子時產生干擾的可能性最小,所以推薦使用肝素鋰作為抗凝劑,目前在血液檢驗中,肝素鋰正在逐步取代肝素鈉。

1. 用于血液透析后病人生化檢驗:血液透析后病人的血液樣本是很多醫院檢驗科所要面臨的一種特殊樣本,許多檢驗人員面對此類樣本時常常感到束手無策。這是因為透析病人在血液透析過程中,使用了含有肝素的抗凝藥物如低分子肝素鈣等,此時由于血液中含有一定量的肝素抗凝藥物,血液抽取后置于普通管或分離膠/促凝劑管中均極不容易凝固,不易分離出血清。

有報道稱用肝素鋰抗凝血漿與血清檢測血K,其檢測結果分析有偏倚,可能為血樣在離心過程中轉速過高,纖維蛋白絲網羅的血塊中的紅細胞受擠壓破壞溶血,紅細胞內的K 離子釋放至血清所致。另血液樣本在轉運和凝固過程中難免有少量的紅細胞破壞,造成血K 的輕度偏高。

另有報導用肝素鋰抗凝血漿與血清檢測CK-MB、LDH、GLU等結果有顯著差異,可能系標本有溶血或放置時間過長血糖分解之故。相反,肝素抗凝劑有不影響細胞體積,不易造成溶血的優點,不需要水浴放置,可直接離心。肝素鋰抗凝血漿測得的血K、GLU、LDH等,準確地說更接近病人體內的真實濃度。因此,盡快建立血漿生化檢驗參考值體系,有助于臨床醫生對患者病情作出準確判斷。

2. 用于常規生化檢:研究結果表明,大部分常規生化檢驗項目可用肝素鋰抗凝血漿代替血清,但Glu、K+、Na+、CI-、P3-應建立血漿參考范圍,其余項目可用血清參考范圍解釋血漿檢測結果;Lp (a)、PA、HBDH、LDH、CK、CKMB、IgM 等項目不宜用肝素鋰抗凝血漿樣本進行測定,血漿Lp(a)隨著肝素濃度增大而增大。

制備[2]

肝素鋰的制備,目前國內公開了離子平衡交換法制備肝素鋰,該法部分工藝環節需要低溫條件(10℃以下)操作,對物料及環境溫度控制要求較高,硬件設施投入較大;該法在去蛋白工藝環節采用強酸性條件操作(PH1.5),對肝素活性損失較大(肝素溶液在低PH值環境下很不穩定,極易降解失活),影響最終活性收率和效價,可操作性不強;該法采用超濾濃縮分離技術,超濾設備昂貴,硬件投入較大;該法采用的離子平衡交換方式,是以高濃度鋰離子不斷介入的方式來實現肝素鈉 向肝素鋰的轉換,無法保證動態離子平衡轉換的充分性和連續穩定性。

國外制備肝素鋰均采用離子交換法,該法需要選用精品肝素鈉為原料,原料成本高,而且在離子交換過程中可引起PH急 劇下降,嚴重影響產品的收率和效價,并且交換過程需要在低溫提條件下進行,導致肝素鋰生產硬件設施投入較大,生產成本較高。

有研究提供一種肝素鋰制備方法,以解決上述問題。它是以下列步驟制備:

1)粗品肝素酶解:將粗品肝素鈉溶解,調PH值為7.5?9.0,升溫至50?55℃,加入肝素酶解胰酶,保溫4?5小時,調PH值 9.0?11,升溫至85℃90℃后,冷卻,過濾去除沉淀物,濾液用乙醇沉淀,收集沉淀物(A);

2)去蛋白:步驟1所得沉淀物(A)用水溶解,攪拌,調 PH至9?11,加入蛋白質絮凝沉淀劑,攪拌,靜置,過濾去除沉淀,收集濾液(D),濾液(D)調PH至11?13值,攪拌,靜置,過濾去除沉淀,收集濾液(E),濾液(E)調PH值至中性,用乙醇沉淀,收集沉淀物(B);

3)氧化脫色:將步驟2所得沉淀物(B)用水溶解,用過氧 化氫氧化24?48小時,調整PH至10.5?11.5后,過濾去除沉淀物,收集濾液(F),濾液(F)調PH值至6.5?7.5,用乙醇沉淀,收集 沉淀物(C);

4)樹脂交換:將步驟3所得沉淀物(C)用水溶解,加入 LiCl,攪拌溶解,通過樹脂柱進行離子交換,收集過柱流出液,得肝素鋰溶液;

5)沉淀、脫水、干燥:將步驟4所得肝素鋰溶液,過濾,用乙醇沉淀,收集沉淀物(G),沉淀物(G)脫水,然后真空干 燥,粉碎,得肝素鋰精品。

肝素鋰制備及應用

主要參考資料

[1] 韓群. 淺析肝素鋰抗凝血漿代替血清用于臨床生化檢驗的可行性[J]. 中國實用醫藥, 2018 (2018 年 18): 195-197.

[2] CN201210080205.6肝素鋰制備方法

[3] 羅利民, 黃艷平, 畢衛紅, 等. 肝素鋰抗凝血漿用于血液透析后病人生化檢驗的評估與應用[J]. 實驗與檢驗醫學, 2016, 34(1): 59-61.

[4] 馬鴻雁. 肝素鋰抗凝血漿用于常規生化檢驗的評估[J]. 實驗與檢驗醫學, 2013, 31(1): 36-38.

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