9054-89-1 / 超氧化物歧化酶的制備方法

背景及概述^[1]

超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)是一類氧化還原金屬酶，能清除體內超氧自由基陰離子，有效地預防超氧自由基陰離子對機體的損害作用，是機體內氧自由基的頭號殺手，是生命健康之本。SOD酶廣泛分布于各種生物體內，如動物、植物、微生物等。

制備^[1-2]

報道一、

從蒜片加工廢水中提取大蒜超氧化物歧化酶的方法：

以多個400目的不銹鋼篩網為支撐材料，以200目的硅藻土為過濾介質，將硅藻土料液通過泵循環，預先在不銹鋼篩網上均勻涂上5毫米厚的硅藻土過濾層，然后對10立方蒜片加工廢水進行過濾，除去蒜片加工廢水中的大顆粒雜質和膠體物質；對過濾后的蒜片加工廢水打入反應釜，加熱到75℃，加熱時間20分鐘，使蒜片加工廢水中的雜蛋白變性絮凝，冷卻至30℃，再經硅藻土掛膜過濾后，去除蒜片加工廢水中的雜蛋白質；然后將蒜片加工廢水經過濾澄清后，用泵打入裝有1000公斤超氧化物歧化酶(SOD)分子印跡樹脂的樹脂柱，控制進樣流速500立升/小時，選擇性吸附廢水中的大蒜超氧化物歧化酶(SOD)，大蒜多糖等雜質隨廢水流出，實現了大蒜超氧化物歧化酶(SOD)與大蒜多糖等雜質的分離；超氧化物歧化酶(SOD)分子印跡樹脂吸附飽和后，先用0.5立方去離子水沖洗樹脂，然后用200公斤洗脫劑洗脫，控制洗脫流速100立升/小時，收集到含大蒜超氧化物歧化酶(SOD)的洗脫液250公斤；洗脫液經截留分子量20000的聚砜膜濃縮至固體質量百分比含量5％的大蒜超氧化物歧化酶(SOD)濃縮液50公斤；將質量百分比含量5％的大蒜超氧化物歧化酶(SOD)濃縮液，經-55℃的低溫冷凍干燥10小時后，得到粉狀大蒜超氧化物歧化酶(SOD)3公斤。

大蒜超氧化物歧化酶(SOD)提取率0.05％，大蒜超氧化物歧化酶(SOD)的酶比活性2670U/mg。

報道二、

一種利用結晶法分離提純超氧化物歧化酶的方法，其特征在于步驟如下：

(1)利用超聲破碎儀破碎細菌發酵培養液(功率30％，開5s，停3s，破碎1h)，12000rpm離心40min，取上清，用鹽酸調節溶液pH＝5.0，4℃靜置1h后，12000rpm離心40min后取上清，在壓力為0.5Mpa下，用截留分子量為3KDa的超濾膜，將上清濃縮至30mg/mL；

(2)將沉淀劑溶解在0.1mM，pH3.0的檸檬酸溶液中，配制成40mg/mL的PEG8000沉淀劑溶液，按1:1的體積比加入到步驟(1)中的蛋白溶液中，混合均勻后加入200uL的籽晶，置于4℃控溫箱中攪拌結晶，攪拌速度為200rpm；

(3)將步驟(2)結晶完成后的溶液4℃、12000rpm離心30min取沉淀，所得沉淀即為超氧化物歧化酶晶體混合物；

(4)在步驟(3)中所得的溶液中加入40mg/mL的PEG8000溶液，緩慢攪拌混勻后，離心棄上清，重復該過程三次以徹底清洗晶體。

(5)以相同的結晶條件，結晶方法，重復結晶兩次以上，以得到更高純度的超氧化物歧化酶晶體。

(6)將步驟(5)所得晶體溶液冷凍干燥，得到超氧化物歧化酶純度為95％，比活力為4335U/mg。

參考文獻

[1][中國發明,中國發明授權]CN202010360991.X超氧化物歧化酶及其制備方法、超氧化物歧化酶口服液和固體制劑

[2][中國發明]CN201810289241.0一種利用結晶法分離提純超氧化物歧化酶的方法