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961-07-9 / 2′-脫氧鳥苷的制備方法

背景及概述[1][2]

2'-脫氧鳥苷是合成寡脫氧核苷酸等抗病毒、抗腫瘤核酸藥物的重要原料。2'-脫氧鳥苷是一種天然的脫氧核苷,可直接用于制備組合脫氧核苷藥物或者作為化學試劑用于生化研究;同時可作為中間體用于合成一些抗病毒核苷類藥物以及分子標記物,如文獻(JournalofMedicinalChemistry,1985,28:1194-1198)以2'-脫氧鳥苷原料合成8-溴-2'-脫氧鳥苷和8-羥基-2'-脫氧鳥苷等重要分子標記物;文獻(TetrahedronLetters,1982,23(22):2253-2256,1982TetrahedronLetters,1990,31(3):319-322)中報道了合成2'-脫氧鳥苷的6位衍生物,如6-甲氧基、6-氨基等系列重要抗腫瘤的2'-脫氧鳥苷衍生物;另外中國專利CN201110114010公開報道了采用2'-脫氧鳥苷為原料合成致癌或抗癌過程中的重要分子標記物N7-鳥嘌呤烷化物。

2'-脫氧鳥苷的制備方法

制備方法[1-2]

報道一、

生物催化法合成2'-脫氧鳥苷

1)產酶菌體的收集與預處理

產酶菌株發酵乳桿菌(Lactobacillusfermentum)CGMCC1.1880在上述公知的產酶培養條件下進行繁殖生長并富產脫氧核苷核糖轉移酶,得1升產酶發酵液,采用離心(離心條件:6000轉/分鐘,離心20分鐘),收集得到57克菌體漿狀物,然后用500毫升去離子水將菌體重新制成菌懸液并攪拌10分鐘進行洗滌菌體,然后再上述相同的離心條件離心收集菌體,得到53克洗滌后的菌體漿狀物。然后用1升0.5M磷酸緩沖液(pH8.0)洗滌,再經同樣條件離心得到50克菌體漿狀物。該菌體漿狀物即為制備2'-脫氧鳥苷的生物催化劑。

2)生物催化合成2'-脫氧鳥苷

先在2升反應器將用800毫升去離子水使25克聚乙醇10000(PEG10000)溶解完全,然后一邊攪拌一邊加入30克磷酸二氫鉀,溶解完全后,加入16.5克β-胸苷和10.3克鳥嘌呤,攪拌混合均勻。然后再加入步驟1)所得到50克菌體漿狀物,同樣攪拌使菌體分撒均勻。接著用去離子水定容至1升,最后用5M氫氧化鉀溶液將轉化體系的pH值調至8.0。pH值調節完畢后,置于水浴中,將反應溫度升至40℃進行生物催化反應,反應過程中一直攪拌。反應36小時后,取樣測定β-胸苷轉化率和產物2'-脫氧鳥苷產率。測定方法采用高效液相色譜法(HPLC),其檢測方法如下所示:

色譜柱:DiamonsilC18,5um,250x4.6mm;流動相:甲醇:0.02mol磷酸鉀緩沖鹽=20:80;流速:0.8ml/min;檢測波長:254nm

HPLC分析結果顯示,β-胸苷轉化率為72%,產物2'-脫氧鳥苷產率為13.1g/L。

報道二、

在250ml三角瓶中裝入50ml培養基,其中,含牛肉膏1%,蛋白胨1%,酵母膏0.5%,NaCl 0.5%,pH 7.0,于118℃滅菌30min,冷卻后接入乙酰短桿菌QD96,于30℃振蕩(200r/min)培養16h,將培養液經4000r/min冷凍離心30min,再用0.05mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.0)洗滌,再離心,所得之菌體冷藏保存,作為核苷酸磷酸化酶備用。

在100ml圓底燒瓶中,裝入50ml底物溶液,其中含鳥苷酸和胸苷濃度各為40mol/L,磷酸緩沖液為25mmol/L,菌體加入量為5%(濕重),在恒溫水浴中60℃攪拌反應2h,反應完畢,冷凍離心去除菌體和少量胸腺嘧啶沉淀物。然后將溶液經HPLC檢測其中含24mmol/L脫氧鳥苷,其轉化率達60%(見圖2)。經陰離子交換樹脂分離,可獲得0.26g2'-脫氧鳥苷。

其中,陰離子交換樹脂分離的方法,為公知的方法,在中國專利ZL98110601.3,ZL0213639.2等中已經有詳細的報道。

主要參考資料

[1][中國發明,中國發明授權]CN201510140553.1一種核苷類藥物中間體2'-脫氧鳥苷的生產方法

[2][中國發明] CN201010611733.0 用乙酰短桿菌的核苷磷酸化酶合成2'-脫氧鳥苷的方法

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