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鴨坦布蘇病毒RT-PCR試劑盒

品牌:紀寧生物

貨號:JN28810

規格: 50次

聯系方式:021-54721350

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產品詳情

鴨坦布蘇病毒RT-PCR試劑盒
產品及特點
鴨坦布蘇病毒(Duck Tambusu Virus,TMUV)是一種 RNA 病毒,會引起一種以鴨出血性卵巢炎為主要病變特點的新發、急性、烈性傳染病,病鴨表現為采食減少,產蛋率迅速下降,種蛋受精率降低 10%左右,體溫升高,排綠色稀糞,后期神經癥狀明顯,表現癱瘓、翻個,公鴨睪丸出血、萎縮,精子質量下降、受精率低,給我國養鴨業帶來嚴重的經濟損失,因此鴨坦布蘇病毒的快速準確鑒定對該病的預防和檢疫有著重要作用。本產品根據 PCR 原理開發,可用于科研領域快速檢測鴨坦布蘇病毒。
1. 一站式,用戶不需要單獨準備每種成分,包括引物和對照。
2. 根據鴨坦布蘇病毒的保守基因序列設計的引物,具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術,RT 和 PCR 兩步在一個試管內完成,不需要中間轉移樣品,降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
6. 本產品只能用于科研,不能用于臨床。
規格及成分

編號

成分

規格

試劑一

5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer

200 μL(橘黃蓋)

試劑二

MMLV-Taq Mix

75 μL(紅蓋

試劑三

超純水

1 mL(亮黃蓋)

試劑四

鴨坦布蘇病毒 RT-PCR 引物混合液

100 μL(白蓋)

試劑五

鴨坦布蘇病毒 RT-PCR 陽性對照(1×10E8 /μL)

50 μL(黃蓋)

試劑六

使用手冊

1 份

注:為避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供專一的DNA 片段作為陽性對照。 
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分開放置,因為其容易污染其他成分,造成假陽性。
自備試劑: 
樣品 RNA。
使用方法:  
一、樣品 DNA 的制備: 
1. 如果有 N 個樣品,必須設置 N+2 個提取,多出的一個是 PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用 10μL 鴨坦布蘇病毒PCR陽性對照的 1000 倍稀釋液作為制備的陽性對照。可以用水作為制備的陰性對照。制備所得成為樣品 RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 RNA 提取試劑盒兼容。可以選購本公司的柱式病毒 RNAout。
二、設置RT-PCR反應(20μL體系):
3. 如果有 N+2 個樣品,則標記 N+4 個 PCR 管(額外增加的兩個管一個是RT-PCR 陽性對照,另一個是 RT-PCR 陰性對照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分:

成份

N+2 個

樣品管

RT-PCR

陰性對照

RT-PCR

陽性對照

5×雙酶一管式RT-PCR Buffer

4 μL

4 μL

4 μL

鴨坦布蘇病毒 RT-PCR 引物混合液

2 μL

2μL

2μL

N+2 個制備的 RNA 樣品

12.5μL

--

--

超純水

--

12.5μL

--

鴨坦布蘇病毒 RT-PCR 陽性對照的 1000倍稀釋液

--

--

12.5μL

MMLV-Taq Mix

1.5 μL

1.5 μL

1.5 μL

4. 上機進行 RT-PCR,RT-PCR 反應參數為:

過程

溫度

時間

逆轉錄

42℃

30 min

預變性

95℃

5 min

PCR 反應35個循環

95℃

30 sec

58℃

30 sec

72℃

20 sec

最后延伸

72℃

7 min

三、電泳檢測:
5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果。如果陰性對照有擴增產物或陽性對照無擴增產物,則說明實驗失敗,需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴增產物、陽性對照必須有預期條帶出現,才有必要分析樣品的實驗結果,如果有預期片段大小的擴增產物則為陽性,如果無則為陰性。 
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