駑巴貝斯蟲PCR試劑盒

品牌：紀(jì)寧生物

貨號(hào)：JN32101

規(guī)格： 50次

聯(lián)系方式：021-54721350

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產(chǎn)品詳情

駑巴貝斯蟲PCR試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供DNA模板。
2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增駑巴貝斯蟲，與其他病原沒有交叉反應(yīng)。
3. 提供陽性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。
規(guī)格及成分：

編號(hào)	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.0	1mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1mL（亮黃色）
試劑三	駑巴貝斯蟲PCR引物混合液	100μL（白蓋）
試劑四	駑巴貝斯蟲PCR陽性對(duì)照（1×10E8 /μL）	50μL（黃蓋）
試劑五	使用手冊(cè)	1 份

運(yùn)輸及保存：
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。
自備試劑：
樣品 DNA。
使用方法：
一、樣品 DNA 的制備：
1. 用自選方法純化N+2個(gè)樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。可以選用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N個(gè)樣品，則需要做N+2個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽性對(duì)照和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽性對(duì)照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加10μL駑巴貝斯蟲PCR陽性對(duì)照的1000倍稀釋液而得，樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板 DNA放冰上待用。
二、設(shè)置PCR反應(yīng)(40 μL 體系)：
3. 對(duì)N+2個(gè)樣品，在PCR時(shí)需要增加一個(gè)PCR陽性對(duì)照和一個(gè)PCR陰性對(duì)照，故需要設(shè)置N+4個(gè)反應(yīng)。在N+4個(gè)PCR管中分別加入下列成分：

成份	N+2個(gè)樣品管	PCR陰性對(duì)照	PCR陽性對(duì)照
PCR Magic Mix 3.0	各20μL	20μL	20μL
駑巴貝斯蟲PCR引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2個(gè)樣品DNA模板	各18μL	--	--
PCR陰性對(duì)照（水）	--	18μL	--
PCR陽性對(duì)照（駑巴貝斯蟲PCR陽性對(duì)照1000倍稀釋液）	--	--	18μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過程	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR反應(yīng)3個(gè)循環(huán)	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、電泳檢測(cè)：

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。

PCR 產(chǎn)物陽性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效。對(duì)沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。

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