一、基本信息

細胞名稱

(A549/DDP)人非小細胞肺癌細胞順鉑耐藥株

細胞編號

JN-CC2311

細胞品牌

紀寧生物

細胞規格

1×10?cells/T25培養瓶或者1mL凍存管包裝

細胞來源

人

組織來源

肺

生長特征

貼壁生長

細胞形態

上皮細胞樣

特別提醒

待細胞長到70-80%的匯合度時，去掉培養液，加入含 500ng/ml DDP 藥物的培養液，放入培養箱，這段時間肯定會有小部分細胞懸浮起來，但是不要緊，通過換液可以去掉，下面的細胞待長滿就可以消化傳瓶了，這時可以一直用含藥培養液來消化培養細胞，一兩代之后可以將藥物濃度提高到 1000ng/ml，含藥培養液用于細胞培養都沒問題的，凍存的時候就不要在凍存液里面加藥物了。(注明：用不含藥物培養基培養一周到兩周，再用含藥培養基培養。)

細胞代數

10代以內

細胞貨期

現貨，1周左右

培 養 基

90% DMEM+10% FBS+PS

培養條件

氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件

無血清凍存液，液氮儲存

供應范圍

僅限于科研實驗使用，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用

支原體檢測

無

二、細胞培養操作

T25瓶－細胞操作

收貨處理

用75%酒精擦拭細胞瓶表面，放37度培養箱內靜置培養2-4h，以便穩定細胞狀態

傳代密度

細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養

傳代比例

首次傳代建議1:2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。
是1個T25瓶傳2個10cm皿

傳代方法

1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培養瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養瓶置于37℃培養箱中消化2-5 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加2-3ml完全培養基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液后吹勻。
3.細胞懸液按1:2比例分到新的含8 ml培養基的新皿中或者瓶中，置于培養箱中培養。

注意事項

1.運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。

2.因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現象。

凍存管－細胞操作

收貨處理

收到細胞后，需立即轉入液氮凍存或直接復蘇

傳代密度

第二天換液并檢查細胞密度

傳代比例

一管細胞建議接種到10cm培養皿或者T25瓶

傳代方法

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養基，培養過夜）第二天換液并檢查細胞密度。

注意事項

1.收貨時若發現干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細胞接種觀察
若未融化可以將細胞按正常步驟保存。

2.為保證細胞的高存活率，收到產品后，請立即解凍復蘇細胞。

凍存－細胞操作

凍存液配方

無血清凍存液，液氮儲存

細胞密度

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存，以T25瓶為例。

三、售后服務

細胞予重發

1.細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發。

2.收到細胞未開封，如出現污染狀況，重發。

3.收到細胞3天內，發現污染問題，經核實后，重發。

4.常溫發貨的細胞靜置2小時后，干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后，絕大多數細胞未存活，經核實后，重發。

5.常溫發貨的細胞靜置22小時并且未開封或干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后，出現污染，經核實后，重發。

6.細胞活性問題，請在收到產品3天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經核實后，重發。

細胞不重發

1.客戶操作造成細胞污染，不重發。

2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態不好，不重發。

3.非我們推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發。

4.細胞狀態不好，未提供真實清晰的培養前3天的細胞狀態照片，不重發。

5.細胞培養時經其它處理導致細胞出現問題的，不重發。

6.收到細胞發現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發。

四、特別說明

上海紀寧生物客戶購買本公司的細胞過程中，有任何技術問題或實驗問題，都可以撥打我們的免費服務電話15800441226 / 021-54721350，我們隨時給予技術中／實驗中的免費解答。