一、基本信息

細胞名稱

Daudi-LUC/人Burkitt's淋巴瘤細胞-熒光素酶標記

細胞編號

JN-CC2472

細胞品牌

紀寧生物

細胞規格

1x10?cells/T25培養瓶或者1mL凍存管

種屬來源

人

組織來源

外周血；B淋巴母細胞；Burkitt's淋巴瘤

細胞形態

淋巴母細胞

細胞簡介

Luciferase Daudi細胞穩定表達螢火蟲熒光素酶。該細胞株性狀穩定，培養時不需要添加抗生素維持。可用作螢火蟲熒光素酶活性檢測中的陽性對照，也可用于活體動物成像實驗。Daudi-LUC細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。1967年五月E. Klein and G. Klein從一位16歲黑人男性Burkitt's淋巴瘤患者建立了Daudi細胞株。 表面免疫球蛋白陽性(sIg+)。Β2-微球蛋白陰性，EBNA陽性，并有衣殼抗原VCA。細胞株攜帶EB病毒。 Daudi是典型的B淋巴母細胞，廣泛應用于白血病發生機理的研究。

puro藥篩濃度

Daudi-LUC細胞puro藥篩濃度為0.5ug/ml，培養過程中可不用再添加puro，如若擔心抗性隨著傳代時間降低，可定期用0.2ug/ml濃度puro維持

生物安全等級

2

生長特性

懸浮細胞

生長條件

氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

培 養 基

RPMI-1640+20% FBS+PS

凍存條件

無血清凍存液，液氮儲存

細胞貨期

現貨，1周左右

發貨方式

復蘇發貨（T25瓶免運輸費用）/  凍存發貨（需加干冰運輸費用）

供應范圍

僅限于科研實驗使用，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用

二、細胞培養操作

Ｔ25瓶

收貨處理

觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置于37度培養箱放置2-4h，以便穩定細胞狀態

傳代密度

細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養

傳代比例

首次傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿

傳代方法

方法一：收集Daudi-LUC細胞，1000RPM條件下離心3-5min分鐘，棄去上清液，補加1-2ml培養液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余Daudi-LUC細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

注意事項

懸浮細胞收貨注意事項：

1、收貨時需鏡下拍照（看密度、狀態）

2、靜置后需鏡下拍照（看整體密度）

a.如密度50%以下，建議換液并豎瓶培養

b.如密度50%-80%，建議換液培養，隔天觀察密度

c.如密度90%，建議傳代

3、換液及傳代處理前，培養瓶豎著放置至少半小時（使細胞沉到瓶底）；收集上清，必須將瓶內所有培養基（70ml）全部收集！并用PBS（10ml）潤洗瓶底并收集！離心轉速為1000rpm，5min。

4. 運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。

5. 因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現象。

凍存管

收貨處理

到細胞后，需立即轉入液氮凍存或直接復蘇

傳代密度

第二天換液并檢查細胞密度

傳代比例

一管細胞建議接種到10cm培養皿或者T25瓶

傳代方法

將含有1 mLDaudi-LUC細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養基，培養過夜）第二天換液并檢查Daudi-LUC細胞密度。

注意事項

1. 收貨時若發現干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細胞接種觀察，若未融化可以將細胞按正常步驟保存。

2. 為保證細胞的高存活率，收到產品后，請立即解凍復蘇細胞。

三、細胞凍存操作

凍存液配方

無血清凍存液，液氮儲存

細胞密度

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例

凍存方法

a、收集細胞及細胞培養液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。

b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項

凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調整實驗方案

四、售后服務

細胞予重發

1.細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發。

2.收到細胞未開封，如出現污染狀況，重發。

3.收到細胞3天內，發現污染問題，經核實后，重發。

4.常溫發貨的細胞靜置2小時后，干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后，絕大多數細胞未存活，經核實后，重發。

5.常溫發貨的細胞靜置22小時并且未開封或干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后，出現污染，經核實后，重發。

6.細胞活性問題，請在收到產品3天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經核實后，重發。

細胞不重發

1.客戶操作造成細胞污染，不重發。

2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態不好，不重發。

3.非我們推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發。

4.細胞狀態不好，未提供真實清晰的培養前3天的細胞狀態照片，不重發。

5.細胞培養時經其它處理導致細胞出現問題的，不重發。

6.收到細胞發現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發。

五、特別說明

上海紀寧生物客戶購買本公司的細胞過程中，有任何技術問題或實驗問題，都可以撥打我們的免費服務電話15800441226 / 021-54721350，我們隨時給予技術中／實驗中的免費解答。