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一、基本信息 |
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細胞名稱 |
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細胞編號 |
JN-CC2479 |
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細胞品牌 |
紀寧生物 |
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細胞規格 |
1x10?cells/T25培養瓶或者1mL凍存管 |
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種屬來源 |
人 |
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組織來源 |
U251膠質瘤耐藥篩選 |
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細胞形態 |
上皮細胞樣 |
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細胞簡介 |
Luciferase U251 MG細胞穩定表達螢火蟲熒光素酶。該細胞株性狀穩定，培養時不需要添加抗生素維持。可用作螢火蟲熒光素酶活性檢測中的陽性對照，也可用于活體動物成像實驗。U251 MG/TMZ細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。通過外植技術衍生自惡性膠質母細胞瘤腫瘤。 |
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puro藥篩濃度 |
U251 MG/TMZ細胞puro藥篩濃度為1.0ug/ml，培養過程中可不用再添加puro，如若擔心抗性隨著傳代時間降低，可定期用0.5ug/ml濃度puro維持 |
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細胞代數 |
10代以內 |
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生物安全等級 |
1 |
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生長特性 |
貼壁生長 |
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生長條件 |
氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ |
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培 養 基 |
90%DMEM+10%FBS+PS（+16ug/mL TMZ） |
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凍存條件 |
無血清凍存液，液氮儲存 |
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細胞貨期 |
2周左右 |
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發貨方式 |
復蘇發貨（T25瓶免運輸費用）/ 凍存發貨（需加干冰運輸費用） |
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供應范圍 |
僅限于科研實驗使用，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用 |
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二、細胞培養操作 |
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Ｔ25瓶 |
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收貨處理 |
觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置于37度培養箱放置2-4h，以便穩定細胞狀態 |
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傳代密度 |
細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養 |
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傳代比例 |
首次傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 |
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傳代方法 |
a、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培養瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養瓶置于37℃培養箱中消化2-5 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加2-3ml完全培養基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液后吹勻。 c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中置于培養箱中培養。 |
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注意事項 |
1. 運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。 2. 因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現象。 |
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凍存管 |
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收貨處理 |
到細胞后，需立即轉入液氮凍存或直接復蘇 |
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傳代密度 |
第二天換液并檢查細胞密度 |
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傳代比例 |
一管細胞建議接種到10cm培養皿或者T25瓶 |
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傳代方法 |
將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養基，培養過夜）第二天換液并檢查細胞密度。 |
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注意事項 |
1. 收貨時若發現干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細胞接種觀察，若未融化可以將細胞按正常步驟保存。 2. 為保證細胞的高存活率，收到產品后，請立即解凍復蘇細胞。 |
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三、細胞凍存操作 |
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凍存液配方 |
無血清凍存液，液氮儲存 |
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細胞密度 |
待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例 |
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凍存方法 |
a、收集細胞及細胞培養液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。 b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。 c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
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注意事項 |
凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調整實驗方案 |
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四、售后服務 |
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細胞予重發 |
1.細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發。 2.收到細胞未開封，如出現污染狀況，重發。 3.收到細胞3天內，發現污染問題，經核實后，重發。 4.常溫發貨的細胞靜置2小時后，干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后，絕大多數細胞未存活，經核實后，重發。 5.常溫發貨的細胞靜置22小時并且未開封或干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后，出現污染，經核實后，重發。 6.細胞活性問題，請在收到產品3天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經核實后，重發。 |
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細胞不重發 |
1.客戶操作造成細胞污染，不重發。 2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態不好，不重發。 3.非我們推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發。 4.細胞狀態不好，未提供真實清晰的培養前3天的細胞狀態照片，不重發。 5.細胞培養時經其它處理導致細胞出現問題的，不重發。 6.收到細胞發現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發。 |
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五、特別說明 |
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上海紀寧生物客戶購買本公司的細胞過程中，有任何技術問題或實驗問題，都可以撥打我們的免費服務電話15800441226 / 021-54721350，我們隨時給予技術中／實驗中的免費解答。 |
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