英文名稱 ： Butyrylcholinesterase Activity Assay
產(chǎn)品包裝 ： 盒裝
產(chǎn)品規(guī)格 ： 50T/48S
儲(chǔ)存條件 ： -20℃
檢測(cè)方法 ： 可見分光光度法
有 效 期 ： 6個(gè)月
產(chǎn)品組成 ：
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試劑名稱
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規(guī)格
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保存條件
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試劑一
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液體100 mL×1瓶
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2-8℃保存
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試劑二
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粉劑×1瓶
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-20℃保存
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試劑三
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液體30mL×1瓶
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-20℃保存
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產(chǎn)品說(shuō)明：
丁酰膽堿酯酶(Butyrylcholinesterase，BchE，EC3.1.1.8)，又稱血漿膽堿酯酶，假性膽堿酯酶，是一種絲氨酸水解酶，由肝臟合成后進(jìn)入血液，幾乎存在于所有動(dòng)物組織中。BchE結(jié)構(gòu)與乙酰膽堿酯酶(AchE)相似，但底物特異性和抑制劑敏感性不同。與AchE相比，BchE能夠有效水解較大的膽堿酯，如丁酰膽堿和苯甲酰膽堿，而且可以清除有機(jī)磷類農(nóng)藥、氨基甲酸酯類農(nóng)藥等神經(jīng)毒劑的毒害作用。
有研究表明，BchE可作為阿爾茨海默病治療的重要靶點(diǎn)。BchE催化丁酰膽堿水解生成膽堿，膽堿與二硫?qū)ο趸郊姿?DTNB)作用生成5-巰基-硝基苯甲酸(TNB)；TNB在412nm處有吸收峰，通過(guò)測(cè)定412nm吸光度增加速率，計(jì)算BchE活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、分析天平、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
注意事項(xiàng)：
為保證結(jié)果準(zhǔn)確，請(qǐng)嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)間，建議兩人進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，一人加樣，一人計(jì)時(shí)。如果?A測(cè)定接近?A空白，可以增加樣本量后再進(jìn)行測(cè)定；如果A2測(cè)定大于1或ΔA測(cè)定大于0.7，建議將樣本上清用試劑一適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。注意同步修改計(jì)算公式。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1.取0.1018g大鼠肝臟樣本，加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿，離心后上清液用試劑一稀釋4倍，按照測(cè)定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算：ΔA測(cè)定=A測(cè)定2-A測(cè)定1=0.6807-0.3913=0.2894，ΔA空白=A空白2-A空白1=0.3552-0.2931=0.0621，ΔA=ΔA測(cè)定-ΔA空白=0.2273，按樣本質(zhì)量計(jì)算得：BchE活性(U/g質(zhì)量)=[ΔA÷(ε×d)×V反總×10?]÷(W×V樣÷V樣總)÷T×F=2757.966U/g質(zhì)量。
2.取馬血清樣本，用試劑一稀釋64倍，按照測(cè)定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算：ΔA測(cè)定=A測(cè)定2-A測(cè)定1=0.5100-0.3436=0.1664，ΔA空白=A空白2-A空白1=0.3552-0.2931=0.0621，ΔA=ΔA測(cè)定-ΔA空白=0.1043，按液體體積計(jì)算得：BchE活性(U/mL)=[ΔA÷(ε×d)×V反總×10?]÷V樣÷T×F=2061.302U/mL。
