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谷胱甘肽還原酶活性系數(GRAC)/檢測試劑盒/50T

品牌:紀寧生物

貨號:JN38084

規格: 50T/24S

聯系方式:021-54721350

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產品詳情

英文名稱 : Glutathione Reductase Activation Coefficient Assay Kit
產品包裝 : 盒裝
產品規格 : 50T/24S
儲存條件 : -20℃
檢測方法 : 可見分光光度法
有 效 期  : 6個月

產品組成 :

試劑名稱

規格

保存條件

試劑一

液體40 mL×1瓶

2-8℃保存

試劑二

粉劑×1支

2-8℃保存

試劑三 A

粉劑×1支

-20℃保存

試劑三 B

液體1mL×1支

2-8℃保存

試劑四

液體1.2mL×1支

2-8℃保存

試劑五

粉劑×1支

-20℃保存

試劑六

液體20 mL×1瓶

2-8℃保存

試劑七

液體50 mL×1瓶

2-8℃保存


產品說明:

谷胱甘肽還原酶(GlutathioneReductase,GR)是廣泛存在于真核與原核生物中的一種黃素蛋白氧化還原酶,該酶以核黃素衍生物核黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)為輔基,催化NADPH還原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成還原型谷胱甘肽(GSH),維持巰基和膜蛋白處于還原狀態。當生物體內缺乏核黃素時,FAD含量相應減少,GR活性也隨之降低,谷胱甘肽還原酶活性系數(GRActivationCoefficient,GRAC)迅速升高,出現唇炎、口角炎、結膜炎等臨床癥狀。

因此,GRAC用于核黃素營養狀況評價,對于早期發現缺乏病患者采取防治措施具有重要意義。GR催化NADPH還原GSSG,生成GSH,GSH與5,5’-二硫代-雙-(2-硝基苯甲酸)(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoicacid,DTNB)反應產生2-硝基-5-巰基苯甲酸,2-硝基-5-巰基苯甲酸在波長412nm處有特征吸收峰,通過412nm處吸光度的變化可計算GR的活性。根據加入FAD前后GR活性的變化可計算得到GRAC。




注意 :
實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、低溫離心機、分析天平、水浴鍋/恒溫培養箱、1mL玻璃比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

注意事項:
1.建議準備核黃素水平正常的樣本進行檢測,方便與核黃素缺乏的樣本進行比較;如果沒有核黃素水平正常的樣本,可參考一般核黃素水平正常的樣本GRAC為0.9-1.2;
2. 如果樣本測定管吸光值大于1.5,建議將樣本用試劑一稀釋后進行測定;如果樣本測定管吸光值接近空白管,可適當增大樣本質量重新提取或提高加樣表中樣本體積,對照管、空白管蒸餾水需進行相應調整。
3. 樣本蛋白濃度需自行測定。由于提取液中含有一定濃度的蛋白(約0.11mg/mL),所以在測定樣本蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量。

實驗實例 :
1. 取0.1051g大鼠腎臟樣本,加入1mL試劑一進行冰浴勻漿,離心后取上清,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得:A測定=0.482,A對照=0.465,A空白=0.084,計算得:GRAC=(A測定-A空白)÷(A對照-A空白)=1.045。

2. 取10μL人紅細胞,加入990μL試劑一,充分溶血混勻,離心后取上清,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得:A測定=0.530,A對照=0.529,A空白=0.084,計算得:GRAC=(A測定-A空白)÷(A對照-A空白)=1.002。

3. 取馬血清樣本,直接按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得:A測定=0.453,A對照=0.451,A空白=0.084,計算得:GRAC=(A測定-A空白)÷(A對照-A空白)=1.005。
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