一、基本信息

細(xì)胞名稱

B16-F10/GFP小鼠黑色素瘤細(xì)胞帶綠色熒光

細(xì)胞品牌

紀(jì)寧生物

細(xì)胞規(guī)格

1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細(xì)胞英文

B16-F10/GFP

基本形態(tài)

上皮樣 ; 多角形  

傳代方法

1 : 2傳代

生長特性

貼壁生長

消化時(shí)間

4- 5分鐘

凍存條件

無血清細(xì)胞凍存液

完全培養(yǎng)基

1640+10%FBS      B16-F10完全培養(yǎng)基

培養(yǎng)環(huán)境

37℃，5%CO2，95%AIR

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2,5% ；溫度：37℃

供應(yīng)范圍

僅供科研使用

注意事項(xiàng)

每傳 10 代左右，用嘌呤霉素（4ug/ml）鞏固一下

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

到貨處理

1、收到細(xì)胞后，檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已完全揮發(fā)等問題，請(qǐng)即時(shí)聯(lián)系。

2、將細(xì)胞取出轉(zhuǎn)移至液氮或－80 度冰箱保存，建議盡早復(fù)蘇。

3、復(fù)蘇第一管如有活性狀態(tài)問題及時(shí)與我們聯(lián)系，會(huì)有技術(shù)人員與您溝通指導(dǎo)后再復(fù)蘇第二管。

特別說明：未與我方聯(lián)系擅自復(fù)蘇第二管出現(xiàn)問題不予售后。

細(xì)胞復(fù)蘇

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁。

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。

3、棄上清，沉淀用 5ml 完全培養(yǎng)基重懸，接種 T25 培養(yǎng)瓶，于 37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4、第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

細(xì)胞傳代

1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次。

2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。

3、棄上清，沉淀細(xì)胞用 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè) T25），補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存

1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次。

2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。

3、棄上清，沉淀細(xì)胞加入 1ml/支的無血清凍存液，混勻后加入凍存管中。（如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液）

4、將凍存細(xì)胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中，需在-80℃冰箱存放 24 小時(shí)以上。

T25細(xì)胞到貨處理

觀察

1、收到細(xì)胞后，請(qǐng)及時(shí)核對(duì)培養(yǎng)瓶上標(biāo)注的細(xì)胞名稱是否與訂購的細(xì)胞名稱一致以及培養(yǎng)瓶是否有破損或漏液等異常情況。

處理

1、75%酒精棉球擦拭 T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。

2、顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40x,100x,200x 各一張）前三天照片為重要售后依據(jù)，不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。

3、不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞放入 37 度培養(yǎng)箱中靜置 3-4 小時(shí)后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

4、收到細(xì)胞后，及時(shí)查看說明書是貼壁細(xì)胞還是懸浮細(xì)胞形態(tài)，并按常規(guī)貼壁或懸浮細(xì)胞的傳代方法操作。

貼壁

未超過 80%匯合度時(shí)，將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，留 5ml 完全培養(yǎng)基，放入 37℃、5%CO2 孵箱培養(yǎng)；超過 80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。首次傳代，建議 1:2 傳代兩個(gè) T25，傳代時(shí)建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基，進(jìn)行對(duì)比培養(yǎng)。

細(xì)胞注意事項(xiàng)

個(gè)別細(xì)胞貼壁不牢，在運(yùn)輸過程中發(fā)生細(xì)胞脫落，這是正常現(xiàn)象。

請(qǐng)將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm 離心 5min，收集上清（后期對(duì)比培養(yǎng)使用），沉淀加入胰酶 1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化 1-2 分鐘后，加 5ml 完全培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸。然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè) T25），補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，放入37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

（注意：如收到密封培養(yǎng)瓶，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)時(shí)要將培養(yǎng)瓶蓋子擰松)

三、售后服務(wù)

細(xì)胞予重發(fā)

1.細(xì)胞運(yùn)輸中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)。

2.收到細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。

3.收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。

4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置2小時(shí)后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。

5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置22小時(shí)并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。

6.細(xì)胞活性問題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品3天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。

細(xì)胞不重發(fā)

1.客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)。

2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

4.細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。

5.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)。

6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于3天的，不重發(fā)。

四、特別說明

上海紀(jì)寧生物客戶購買本公司的細(xì)胞過程中，有任何技術(shù)問題或?qū)嶒?yàn)問題，都可以撥打我們的免費(fèi)服務(wù)電話15800441226 / 021-54721350，我們隨時(shí)給予技術(shù)中／實(shí)驗(yàn)中的免費(fèi)解答。