一、細胞基本信息

細胞名稱

CD8+T人淋巴細胞

細胞品牌

紀寧生物

細胞規格

5x10?cells/T25或1mL凍存管

種屬來源

人

組織來源

外周血

生長特性

懸浮生長

細胞形態

球形細胞樣

細胞鑒定

流式檢測CD3+CD8+ >97%

支原體檢測

無

培養基

CD8+T人淋巴細胞專用培養基

培養條件

氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

換液頻率

每2-3天換液一次

消化液

0.25%胰蛋白酶

細胞貨期

現貨 ，1周左右

發貨方式

復蘇發貨（免運輸費用）/  凍存發貨（需加干冰運輸費用）

供應范圍

僅限于科研實驗使用，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用

特別說明

具體操作步驟以隨貨產品說明書為主

二、細胞培養操作

收貨處理

取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態

細胞復蘇

將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在750 rpm條件下離心5 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后輕輕吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜。起始密度為每毫升5-10×105個細胞。

傳代密度

細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養

傳代比例

首次傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿

傳代方法

搖晃培養瓶，使細胞粗略混勻，取細胞計數，按每毫升2-3×105個活細胞的細胞密度進行全換液或半換液。

凍存液

10%DMSO+50%FBS+40%完全培養基

細胞凍存

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例

a、收集細胞及細胞培養液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。

b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5x106~ 1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

三、注意事項

重要提醒

1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。

4. 運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。

到貨須知

1. 收到細胞后，首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，干冰運輸的細胞檢查干冰是否完全揮發，細胞是否解凍，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照（當天以及第 2,3 天請拍照），記錄細胞狀態 (所拍照片將作為后續服務依據)；建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長狀態。

3. 由于運輸的原因，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現象。個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

4. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

四、售后服務

細胞予重發

1. 細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發。

2. 收到細胞未開封，如出現污染狀況，重發。

3. 收到細胞3天內，發現污染問題，經核實后，重發。

4. 常溫發貨的細胞靜置2小時后，干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后，絕大多數細胞未存活，經核實后，重發。

5. 常溫發貨的細胞靜置22小時并且未開封或干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后，出現污染，經核實后，重發。

6. 細胞活性問題，請在收到產品3天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經核實后，重發。

細胞不重發

1. 客戶操作造成細胞污染，不重發。

2. 客戶嚴重操作失誤致細胞狀態不好，不重發。

3. 非我們推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發。

4. 細胞狀態不好，未提供真實清晰的培養前3天的細胞狀態照片，不重發。

5. 細胞培養時經其它處理導致細胞出現問題的，不重發。

6. 收到細胞發現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發。

五、特別說明

上海紀寧生物客戶購買本公司的細胞過程中，有任何技術問題或實驗問題，都可以撥打我們的免費服務電話15800441226 / 021-54721350，我們隨時給予技術中／實驗中的免費解答。