一、基本信息

細胞名稱

(NRL2細胞株)-黑化大鼠肺成纖維細胞

細胞品牌

紀寧生物

細胞規格

1×10?cells/T25培養瓶

細胞簡介

該黑化大家鼠肺成纖維細胞由本公司制備并提交，可用于基礎研究和科研使用

細胞英文

NRm

種屬來源

大鼠

組織來源

肺

細胞形態

成纖維細胞樣

細胞鑒定

免疫組化顯示波形蛋白(Vimentin)抗體陰性；結蛋白(Desmin)抗體陽性

生長特性

貼壁生長

培 養 基

90%DMEM培養液（內含2mM L-glutamine）+10%胎牛血清

生長條件

氣相：空氣，95% ；二氧化碳，5% ; 溫度：37 ℃

傳代方法

1：2至1：6，每周2次

凍存條件

90% 完全培養基+10% DMSO，液氮儲存

應 用

該細胞可以作為轉染宿主細胞

支原體檢測

陰性

發貨方式

快遞運輸(特殊情況的另處理)

供應范圍

僅限于科研實驗使用，不得用于其他用途

二、接受后處理

處理1

收到細胞后，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片發給我們

處理2

請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h

處理3

棄去T25瓶中的培養基，添加 6ml本公司附帶的完全培養基

處理4

如果細胞密度達80%-90%請及時進行細胞傳代，傳代培養用6ml本公司的完全培養基

處理5

接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發現污染或疑似污染，請及時與我們取得聯系

三、細胞操作

復蘇細胞

將含有1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜)第二天換液并檢查細胞密度。

細胞傳代

如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養:

1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.加 1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3.將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

4.4 min 1000rpm離心去掉上清。加1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml 細胞懸液，注意凍存管做好標識。

細胞凍存

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類:

1.棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

2.4 min 1000rpm離心去掉上清。加1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml 細胞懸液，注意凍存管做好標識。

3.將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項

1.收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2.仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致。若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3.用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落，將細胞置于培養箱內靜置培養 4~6 小時,再取出觀察。此時多數細胞均會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養基再次貼壁培養；如果染色結果顯示細胞無活力，請拍下照片及時和我們聯系，信息確認后我們為您再免費寄送一次。

4.靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內的培養基倒出，留 6~8mL 維持細胞正常培養，待細胞匯合度80%左右時正常傳代。

5.請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養，培養瓶內多余的培養基可收集備用，細胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養基混合，使細胞逐漸適應培養條件。

四、售后服務

細胞予重發

1.細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發。

2.收到細胞未開封，如出現污染狀況，重發。

3.收到細胞3天內，發現污染問題，經核實后，重發。

4.常溫發貨的細胞靜置2小時后，干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后，絕大多數細胞未存活，經核實后，重發。

5.常溫發貨的細胞靜置22小時并且未開封或干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后，出現污染，經核實后，重發。

6.細胞活性問題，請在收到產品3天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經核實后，重發。

細胞不重發

1.客戶操作造成細胞污染，不重發。

2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態不好，不重發。

3.非我們推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發。

4.細胞狀態不好，未提供真實清晰的培養前3天的細胞狀態照片，不重發。

5.細胞培養時經其它處理導致細胞出現問題的，不重發。

6.收到細胞發現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發。

五、特別說明

上海紀寧生物客戶購買本公司的細胞過程中，有任何技術問題或實驗問題，都可以撥打我們的免費服務電話15800441226 / 021-54721350，我們隨時給予技術中／實驗中的免費解答。