一、基本信息

細胞名稱

(HES細胞株)人胚胎皮膚成纖維樣細胞

細胞品牌

紀寧生物

細胞規(guī)格

1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細胞簡介

該人胚胎皮膚成纖維樣細胞由本公司制備并提交，可用于基礎研究和科研使用

細胞英文

HSAS3 ; Human Embryonic Skin

種屬來源

人

組織來源

胚胎皮膚

細胞形態(tài)

成纖維細胞樣

細胞鑒定

免疫組化顯示波形蛋白(Vimentin)抗體陰性；結蛋白(Desmin)抗體陽性

生長特性

貼壁生長

培 養(yǎng) 基

DMEM（內含2mM L-glutamine）+10%胎牛血清(FBS)

生長條件

氣相：空氣，95% ；二氧化碳，5% ; 溫度：37 ℃

傳代方法

1：2至1：6，每周2次

凍存條件

90% 完全培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲存

應 用

該細胞可以作為轉染宿主細胞

支原體檢測

陰性

發(fā)貨方式

快遞運輸(特殊情況的另處理)

供應范圍

僅限于科研實驗使用，不得用于其他用途

二、接受后處理

處理1

收到細胞后，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們

處理2

請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h

處理3

棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基

處理4

如果細胞密度達80%-90%請及時進行細胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司的完全培養(yǎng)基

處理5

接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現污染或疑似污染，請及時與我們取得聯系

三、細胞操作

復蘇細胞

將含有1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜)第二天換液并檢查細胞密度。

細胞傳代

如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng):

1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.加 1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

4.4 min 1000rpm離心去掉上清。加1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml 細胞懸液，注意凍存管做好標識。

細胞凍存

待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類:

1.棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數板計數。

2.4 min 1000rpm離心去掉上清。加1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml 細胞懸液，注意凍存管做好標識。

3.將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項

1.收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發(fā)生請及時和我們聯系。

2.仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3.用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落，將細胞置于培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數細胞均會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結果顯示細胞無活力，請拍下照片及時和我們聯系，信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。

4.靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細胞正常培養(yǎng)，待細胞匯合度80%左右時正常傳代。

5.請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)，培養(yǎng)瓶內多余的培養(yǎng)基可收集備用，細胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件。

四、售后服務

細胞予重發(fā)

1.細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)。

2.收到細胞未開封，如出現污染狀況，重發(fā)。

3.收到細胞3天內，發(fā)現污染問題，經核實后，重發(fā)。

4.常溫發(fā)貨的細胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇2天后，絕大多數細胞未存活，經核實后，重發(fā)。

5.常溫發(fā)貨的細胞靜置22小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇2天后，出現污染，經核實后，重發(fā)。

6.細胞活性問題，請在收到產品3天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經核實后，重發(fā)。

細胞不重發(fā)

1.客戶操作造成細胞污染，不重發(fā)。

2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

4.細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。

5.細胞培養(yǎng)時經其它處理導致細胞出現問題的，不重發(fā)。

6.收到細胞發(fā)現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)。

五、特別說明

上海紀寧生物客戶購買本公司的細胞過程中，有任何技術問題或實驗問題，都可以撥打我們的免費服務電話15800441226 / 021-54721350，我們隨時給予技術中／實驗中的免費解答。