一、細胞基本信息

細胞名稱

人原代NK細胞

細胞品牌

紀寧生物

細胞規格

5x10?cells/T25或1mL凍存管

種屬來源

人

組織來源

外周血

生長特性

懸浮生長

細胞形態

短梭形細胞樣

細胞簡介

自然殺傷細胞(natural killer cell，NK)是機體重要的免疫細胞，不僅與抗腫瘤、 抗病毒感染和免疫調節有關，而且在某些情況下參與超敏反應和自身免疫性疾病的發生。一種穩定表達在NK和LAK細胞表面的LAK-1分子，120kDa，NK細胞在IL-2條件下培養20天LAK-1仍為陽性，而HNK-1(CD57）和CD16部分消失。LAK的殺傷活性可被抗LAK-1 McAb所抑制。自然殺傷細胞刺激因子（natural killer cell stimulatory factor,NKSF) 對NK細胞有刺激作用。IL-2、IL-12、IFN-α、TNF-α以及白細胞調節素(leukoregulin,LR) 對NK細胞的活化和分化有正調節作用， 體外培養時加入上述細胞因子可明顯提高NK的殺傷活性。前列腺素 (PG)E1、E2、D2和腎上腺皮質激素等對NK細胞的活性有抑制作用。

質量檢測

CD56和CD16免疫熒光染色為陽性，純度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等

培養基

人原代NK細胞專用培養基

培養條件

氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

換液頻率

每2-3天換液一次

消化液

0.25%胰蛋白酶

細胞貨期

現貨，2周左右

發貨方式

復蘇發貨（免運輸費用）/ 凍存發貨（需加干冰運輸費用）

供應范圍

僅限于科研實驗使用，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用

特別說明

具體操作步驟以隨貨產品說明書為主

二、細胞培養操作

收貨處理

取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態

傳代密度

細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養

傳代代數

可傳5代左右；3代以內狀態為佳，建議收到細胞后盡快進行相關實驗

傳代比例

首次傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿

傳代方法

1. 吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；

2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養基終止消化；

3. 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的完全培養基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養；

4. 待細胞完全貼壁后，培養觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的完全培養基。

三、注意事項

重要提醒

1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。

4. 運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。

到貨須知

1. 收到細胞后，首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，干冰運輸的細胞檢查干冰是否完全揮發，細胞是否解凍，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照（當天以及第 2,3 天請拍照），記錄細胞狀態 (所拍照片將作為后續服務依據)；建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長狀態。

3. 由于運輸的原因，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現象。個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

4. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

四、售后服務

細胞予重發

1. 細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發。

2. 收到細胞未開封，如出現污染狀況，重發。

3. 收到細胞3天內，發現污染問題，經核實后，重發。

4. 常溫發貨的細胞靜置2小時后，干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后，絕大多數細胞未存活，經核實后，重發。

5. 常溫發貨的細胞靜置22小時并且未開封或干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后，出現污染，經核實后，重發。

6. 細胞活性問題，請在收到產品3天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經核實后，重發。

細胞不重發

1. 客戶操作造成細胞污染，不重發。

2. 客戶嚴重操作失誤致細胞狀態不好，不重發。

3. 非我們推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發。

4. 細胞狀態不好，未提供真實清晰的培養前3天的細胞狀態照片，不重發。

5. 細胞培養時經其它處理導致細胞出現問題的，不重發。

6. 收到細胞發現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發。

五、特別說明

上海紀寧生物客戶購買本公司的細胞過程中，有任何技術問題或實驗問題，都可以撥打我們的免費服務電話15800441226 / 021-54721350，我們隨時給予技術中／實驗中的免費解答。