一、細胞基本信息

細胞名稱

人內皮祖細胞

細胞品牌

紀寧生物

細胞規格

5x10?cells/T25或1mL凍存管

種屬來源

人

組織來源

外周血

生長特性

貼壁生長

細胞形態

長梭狀，不規則細胞

細胞簡介

內皮祖細胞是血管內皮細胞的前體細胞,在生理或病理因素刺激下,可從骨髓動員到外周血參與損傷血管的修復研究顯示,內皮祖細胞在心腦血管疾病、外周血管疾病、腫瘤血管形成及創傷愈合等方面均發揮重要作用，并為缺血性疾病的研究治療提供了新思路。內皮祖細胞具有游走特性，能進一步增殖分化的幼稚內皮細胞，缺乏成熟內皮細胞的特征性表型，不能形成管腔樣結構。其功能主要為參與了出生后缺血組織的血管發生和血管損傷后的修復。

質量檢測

CD31和CD34免疫熒光染色為陽性，純度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等

培養基

人內皮祖細胞專用培養基

培養條件

氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

換液頻率

每2-3天換液一次

消化液

0.25%胰蛋白酶

細胞貨期

現貨，2周左右

發貨方式

復蘇發貨（免運輸費用）/ 凍存發貨（需加干冰運輸費用）

供應范圍

僅限于科研實驗使用，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用

特別說明

具體操作步驟以隨貨產品說明書為主

二、細胞培養操作

收貨處理

取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態

細胞復蘇

將含有1 mL人原代內皮祖細胞細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查人原代內皮祖細胞細胞密度。

傳代密度

細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養

傳代代數

可傳1-2代；不建議多次傳代，建議收到細胞后盡快進行相關實驗

傳代比例

首次傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿

傳代方法

a、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培養瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養瓶置于37℃培養箱中消化1-3 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，加少量培養基終止消化。

c、按6-8 mL/瓶補加培養基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液后吹勻。

d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中，置于培養箱中培養

細胞凍存

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；

a、收集人原代內皮祖細胞細胞及細胞培養液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。

b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL人原代內皮祖細胞細胞懸液，注意凍存管做好標識。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

三、注意事項

重要提醒

1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。

2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。

3. 傳代培養過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。

4. 運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。

到貨須知

1. 收到細胞后，首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，干冰運輸的細胞檢查干冰是否完全揮發，細胞是否解凍，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照（當天以及第 2,3 天請拍照），記錄細胞狀態 (所拍照片將作為后續服務依據)；建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長狀態。

3. 由于運輸的原因，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F象。個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

4. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

四、售后服務

細胞予重發

1. 細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發。

2. 收到細胞未開封，如出現污染狀況，重發。

3. 收到細胞3天內，發現污染問題，經核實后，重發。

4. 常溫發貨的細胞靜置2小時后，干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后，絕大多數細胞未存活，經核實后，重發。

5. 常溫發貨的細胞靜置22小時并且未開封或干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后，出現污染，經核實后，重發。

6. 細胞活性問題，請在收到產品3天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經核實后，重發。

細胞不重發

1. 客戶操作造成細胞污染，不重發。

2. 客戶嚴重操作失誤致細胞狀態不好，不重發。

3. 非我們推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發。

4. 細胞狀態不好，未提供真實清晰的培養前3天的細胞狀態照片，不重發。

5. 細胞培養時經其它處理導致細胞出現問題的，不重發。

6. 收到細胞發現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發。

五、特別說明

上海紀寧生物客戶購買本公司的細胞過程中，有任何技術問題或實驗問題，都可以撥打我們的免費服務電話15800441226 / 021-54721350，我們隨時給予技術中／實驗中的免費解答。